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shanhu1234

新虫 (初入文坛)

[求助] 液相色谱流动相配比改变后,标样的峰高峰面积变化很大 已有8人参与

求救大神,液相色谱菜鸟一枚,在做二氯喹啉酸的农残分析,查阅文献,前处理后跑液相,色谱条件:
流动相(乙腈:水=1:1,水PH用磷酸调到4),流速(1ml/min),波长225nm,进样量20μl
在此条件下,标样出峰时间较早,保留时间4min左右,样品峰不太分开,且8min左右就不出峰。调整了流动相比例后(乙腈:水=1:3),增加水相,保留时间确实后移了,15min左右,但峰高和峰面积明显降低,且浓度较低的基本不能出峰。样品峰值也极小,根本也不好判断是不是我的目标物,求救各位大神!!!
小妹最近因此心力交瘁,晚上做梦都在跑液相。。。。
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
shanhu1234: 金币+1, 有帮助 2015-04-08 10:06:23
出峰时间早 峰高相对较高是正常的;但是调整比例后,浓度较低的就检测不到有点不正常,是不是波长选择不合适,或者进样浓度太低了。
归零
2楼2015-04-02 20:52:20
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xuchao7447

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
shanhu1234: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-04-08 10:06:50
你的图谱中有溶剂峰吗?4min保留太短了!!加大浓度呢,你这只是对照,不需要用这么低浓度的吧
生活就是如此
6楼2015-04-03 08:16:32
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luhuijie2006

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
shanhu1234: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-04-08 10:07:05
引用回帖:
9楼: Originally posted by shanhu1234 at 2015-04-03 09:17:08
我也没全信,但目前色谱条件不调整好,我实验进行不下去呀。紫外相应弱是氘灯的问题吗...

问题1:灯用的时间太长了,有可能能量不足,
问题2:保留时间由4min调整到15min,峰宽变大了,相同浓度的样品信噪比差距很大
这两项都影响你的检测限、定量限
10楼2015-04-03 09:40:21
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韩昕炜

铁虫 (小有名气)

既想推迟出峰时间,又想保留原有较好的峰形,可以试着简单的将流动相改成梯度(如:0——5min,乙腈:水=1:3;5——15min,乙腈:水=1:1.仅作参考),至于低浓度的响应值问题,这要取决于你的仪器的信噪比了,跟流动相木有关系

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23楼2015-04-20 21:22:32
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普通回帖

shanhu1234

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2015-04-02 20:52:20
出峰时间早 峰高相对较高是正常的;但是调整比例后,浓度较低的就检测不到有点不正常,是不是波长选择不合适,或者进样浓度太低了。

感谢回复,波长选择应该是合适的,之前出峰早时都可以,换了流动相比例后,进样浓度1mg/L都已经出峰很小,0.5mg/L基本没有,可能是小了点,但文献中的标曲范围是0.01--20mg/L,我现在该怎么做呢
3楼2015-04-02 21:25:08
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shanhu1234 at 2015-04-02 21:25:08
感谢回复,波长选择应该是合适的,之前出峰早时都可以,换了流动相比例后,进样浓度1mg/L都已经出峰很小,0.5mg/L基本没有,可能是小了点,但文献中的标曲范围是0.01--20mg/L,我现在该怎么做呢...

你检测器使用多长时间了?
归零
4楼2015-04-02 21:36:47
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shanhu1234

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by klicking at 2015-04-02 21:36:47
你检测器使用多长时间了?...

应该挺久了,好几年了
5楼2015-04-02 21:41:15
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shanhu1234

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xuchao7447 at 2015-04-03 08:16:32
你的图谱中有溶剂峰吗?4min保留太短了!!加大浓度呢,你这只是对照,不需要用这么低浓度的吧

有的,我清洗液是纯甲醇,流动相(乙腈:水=1:3)下保留时间是15min呀,溶解浓缩样品也是甲醇,是不是应该流动相换成甲醇和水的混合会好点?
7楼2015-04-03 09:00:06
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peter002

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是浓度太低 加上紫外响应比较弱导致的。文献有时候也不能全信。
8楼2015-04-03 09:05:21
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shanhu1234

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by peter002 at 2015-04-03 09:05:21
应该是浓度太低 加上紫外响应比较弱导致的。文献有时候也不能全信。

我也没全信,但目前色谱条件不调整好,我实验进行不下去呀。紫外相应弱是氘灯的问题吗
9楼2015-04-03 09:17:08
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