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0108winfield

金虫 (正式写手)

[求助] 放线菌发酵产物的HPLC分析条件的摸索 已有1人参与

刚开始做HPLC,要测定的样品成分不清楚,要做HPLC,根据结果做质谱分析,要做HPLC条件摸索,不知从何下手?
因为成分不清楚,无文献可查,求支招。
现在想法是水和甲醇,甲醇从20%-90%,流速1ml/min,全紫外波长检测,不清楚的是是每个梯度跑30分钟,还是20%到90%要用30min?需要进几针?
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信念,就是即使看不到长阶通向何方,却仍愿意迈出第一步。
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
成分不明,全波长扫描外加梯度洗脱就持续梯度洗脱或者断续增加几个断点,持续梯度洗脱20-90如果直接30分钟就转换过去是不是太快了,有可能90%甲醇那会东西都那会冒出来就没用了
个人认为:如果你无文献可以让20-90时间长点比如60-90分钟完成梯度转换,再根据情况增加断点比如停在某一配比15分钟达到分离效果,如果没有文献这种实验就得摸,有可能还要加酸碱来调整峰型或者添加乙腈之类的增加分离度。
个人想法,具体情况还得你自己试去
2楼2015-03-30 14:31:31
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0108winfield

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by czzlnkar at 2015-03-30 14:31:31
成分不明,全波长扫描外加梯度洗脱就持续梯度洗脱或者断续增加几个断点,持续梯度洗脱20-90如果直接30分钟就转换过去是不是太快了,有可能90%甲醇那会东西都那会冒出来就没用了
个人认为:如果你无文献可以让20-90 ...

谢谢你的指导,我想问的是,我就是说每个梯度设置一定的时间,还是选几个梯度设置一定的时长,这样的话我需要进几针,是进一针,还是进几针?谢谢,我刚开始接触这个还不太懂。
信念,就是即使看不到长阶通向何方,却仍愿意迈出第一步。
3楼2015-03-30 14:49:45
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 0108winfield at 2015-03-30 14:49:45
谢谢你的指导,我想问的是,我就是说每个梯度设置一定的时间,还是选几个梯度设置一定的时长,这样的话我需要进几针,是进一针,还是进几针?谢谢,我刚开始接触这个还不太懂。...

这个啊,那就需要试验了,因为你没有预实验不知道哪里适合断点,建议你先进行连续梯度,再根据出峰的时候对应的配比进行选择,混合物的分离都是试的,尤其这种成分不明更没什么经验可以用了
4楼2015-03-30 23:12:07
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 0108winfield at 2015-03-30 14:49:45
谢谢你的指导,我想问的是,我就是说每个梯度设置一定的时间,还是选几个梯度设置一定的时长,这样的话我需要进几针,是进一针,还是进几针?谢谢,我刚开始接触这个还不太懂。...

上面要是没说明白的话意思就是先进第一针使用让机器60-90分钟内连续渐变,根据出峰时间确定相应时间的配比,然后再进一针,在那配比附近进行选择让机器10-15分钟渐变过去维持15-30分钟再渐变到下一个再唯一段时间,根据情况再调,当然每个情况都是等你图谱全部出完再做分析了,包括洗脱时间也得确定。
5楼2015-03-30 23:20:07
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