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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 放线菌发酵产物的HPLC分析条件的摸索
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0108winfield

金虫 (正式写手)

[求助] 放线菌发酵产物的HPLC分析条件的摸索已有1人参与

刚开始做HPLC，要测定的样品成分不清楚，要做HPLC，根据结果做质谱分析，要做HPLC条件摸索，不知从何下手？
因为成分不清楚，无文献可查，求支招。
现在想法是水和甲醇，甲醇从20%-90%，流速1ml/min,全紫外波长检测，不清楚的是是每个梯度跑30分钟，还是20%到90%要用30min？需要进几针？
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信念，就是即使看不到长阶通向何方，却仍愿意迈出第一步。
1楼2015-03-30 14:15:48
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
成分不明，全波长扫描外加梯度洗脱就持续梯度洗脱或者断续增加几个断点，持续梯度洗脱20-90如果直接30分钟就转换过去是不是太快了，有可能90%甲醇那会东西都那会冒出来就没用了
个人认为：如果你无文献可以让20-90时间长点比如60-90分钟完成梯度转换，再根据情况增加断点比如停在某一配比15分钟达到分离效果，如果没有文献这种实验就得摸，有可能还要加酸碱来调整峰型或者添加乙腈之类的增加分离度。
个人想法，具体情况还得你自己试去
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2楼2015-03-30 14:31:31
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0108winfield

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by czzlnkar at 2015-03-30 14:31:31
成分不明，全波长扫描外加梯度洗脱就持续梯度洗脱或者断续增加几个断点，持续梯度洗脱20-90如果直接30分钟就转换过去是不是太快了，有可能90%甲醇那会东西都那会冒出来就没用了
个人认为：如果你无文献可以让20-90 ...

谢谢你的指导，我想问的是，我就是说每个梯度设置一定的时间，还是选几个梯度设置一定的时长，这样的话我需要进几针，是进一针，还是进几针？谢谢，我刚开始接触这个还不太懂。
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信念，就是即使看不到长阶通向何方，却仍愿意迈出第一步。
3楼2015-03-30 14:49:45
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 0108winfield at 2015-03-30 14:49:45
谢谢你的指导，我想问的是，我就是说每个梯度设置一定的时间，还是选几个梯度设置一定的时长，这样的话我需要进几针，是进一针，还是进几针？谢谢，我刚开始接触这个还不太懂。...

这个啊，那就需要试验了，因为你没有预实验不知道哪里适合断点，建议你先进行连续梯度，再根据出峰的时候对应的配比进行选择，混合物的分离都是试的，尤其这种成分不明更没什么经验可以用了
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4楼2015-03-30 23:12:07
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czzlnkar

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 0108winfield at 2015-03-30 14:49:45
谢谢你的指导，我想问的是，我就是说每个梯度设置一定的时间，还是选几个梯度设置一定的时长，这样的话我需要进几针，是进一针，还是进几针？谢谢，我刚开始接触这个还不太懂。...

上面要是没说明白的话意思就是先进第一针使用让机器60-90分钟内连续渐变，根据出峰时间确定相应时间的配比，然后再进一针，在那配比附近进行选择让机器10-15分钟渐变过去维持15-30分钟再渐变到下一个再唯一段时间，根据情况再调，当然每个情况都是等你图谱全部出完再做分析了，包括洗脱时间也得确定。
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5楼2015-03-30 23:20:07
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