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是水货

木虫 (著名写手)

[求助] 做电镜的方法 已有4人参与

求助:我是做蛋白凝胶的,以前做电镜都是冻干后直接去测量,现在有文献报道说做成胶体后,溶于2.5%戊二醛(pBS PH7.2)中1h。然后自来水冲洗,在采用50%,70%,80%,90%,100%的乙醇中,然后制成干样。


那么我有以下问题想咨询:
一、我做的是明胶,凝胶性较强,应当凝胶成什么状态为好?譬如浓度是6.67%,那么凝胶多久后合适?因为凝胶时间过长会导致测不出效果。
二、用不同梯度的无水乙醇洗脱,每个梯度需要的时间是多久?
三、洗脱后有的还没有完全干,有文献报道说是液氮或者干冰下弄干。实验室没有这个怎么办?
四、如果用冷冻干燥机抽真空干燥,样品中含有少量的戊二醛和乙醇,会发生危险吗?

曾经发过e-mail问过这个领域的大牛,却没得到任何回复。希望大家给予指点。
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不倒翁X

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
是水货: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-12 13:05:44
我说一下我实验室肉肠样品凝胶做SEM的前处理方法,你可以参考以下:将凝胶样品切成5×5×1mm(长×宽×高)立方体的薄片(切面尽量光滑平整),放入混合溶液(4%甲醛: 2.5%戊二醛=1:1, v/v)中固定2h;随后用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH7.2)漂洗6~10次,丙酮(100%)溶液梯度脱水,每次各10min,其中乙醇浓度为30%、50%、70%时在4℃环境中进行脱水;随后去除易挥发的有机溶剂,然后用真空冷冻干燥机干燥24h;观察。
10楼2015-06-11 22:28:35
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tofeya

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你去问下做电镜的老师,有些地方可以做前处理的,加入戊二醛之后直接送样就好了
想得太多,做得太少
2楼2015-04-25 12:59:09
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赖穗0911

新虫 (小有名气)

你好 同学 我和你做的类似 想知道你怎么做的 咱们可以交流一下吗?扣扣怎么样

[ 发自小木虫客户端 ]
求解答
3楼2015-04-26 23:56:12
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下,并无新事

【答案】应助回帖

我当时做电镜用的是石蜡切片。
第四个问题:完全可以放心,真空冷冻干燥温那么点有机溶剂完全没有问题。
已有的事,后必再有,已行的事,后必再行。
4楼2015-04-27 09:22:37
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