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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 做电镜的方法
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是水货

木虫 (著名写手)

[求助] 做电镜的方法已有4人参与

求助：我是做蛋白凝胶的，以前做电镜都是冻干后直接去测量，现在有文献报道说做成胶体后，溶于2.5%戊二醛（pBS PH7.2)中1h。然后自来水冲洗，在采用50%,70%,80%,90%,100%的乙醇中，然后制成干样。


那么我有以下问题想咨询：
一、我做的是明胶，凝胶性较强，应当凝胶成什么状态为好？譬如浓度是6.67%，那么凝胶多久后合适？因为凝胶时间过长会导致测不出效果。
二、用不同梯度的无水乙醇洗脱，每个梯度需要的时间是多久？
三、洗脱后有的还没有完全干，有文献报道说是液氮或者干冰下弄干。实验室没有这个怎么办？
四、如果用冷冻干燥机抽真空干燥，样品中含有少量的戊二醛和乙醇，会发生危险吗？

曾经发过e-mail问过这个领域的大牛，却没得到任何回复。希望大家给予指点。
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1楼2015-03-28 10:35:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

不倒翁X

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
是水货: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-12 13:05:44
我说一下我实验室肉肠样品凝胶做SEM的前处理方法，你可以参考以下：将凝胶样品切成5×5×1mm（长×宽×高）立方体的薄片（切面尽量光滑平整），放入混合溶液（4%甲醛: 2.5%戊二醛=1:1, v/v）中固定2h；随后用磷酸盐缓冲液（0.1mol/L，pH7.2）漂洗6~10次，丙酮（100%）溶液梯度脱水，每次各10min，其中乙醇浓度为30%、50%、70%时在4℃环境中进行脱水；随后去除易挥发的有机溶剂，然后用真空冷冻干燥机干燥24h；观察。
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10楼2015-06-11 22:28:35
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普通回帖

tofeya

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你去问下做电镜的老师，有些地方可以做前处理的，加入戊二醛之后直接送样就好了
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想得太多，做得太少
2楼2015-04-25 12:59:09
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赖穗0911

新虫 (小有名气)
你好 同学 我和你做的类似 想知道你怎么做的 咱们可以交流一下吗？扣扣怎么样

[ 发自小木虫客户端 ]
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求解答
3楼2015-04-26 23:56:12
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下，并无新事

【答案】应助回帖

我当时做电镜用的是石蜡切片。
第四个问题：完全可以放心，真空冷冻干燥温那么点有机溶剂完全没有问题。
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已有的事，后必再有，已行的事，后必再行。
4楼2015-04-27 09:22:37
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是水货

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 赖穗0911 at 2015-04-26 23:56:12
你好 同学 我和你做的类似 想知道你怎么做的 咱们可以交流一下吗？扣扣怎么样

我就是将我的样溶解后冷却凝胶，切成小薄片，戊二醛固定，酒精洗脱，却一直没做出来。
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5楼2015-04-27 22:20:03
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是水货

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tofeya at 2015-04-25 12:59:09
你去问下做电镜的老师，有些地方可以做前处理的，加入戊二醛之后直接送样就好了

这个学校不处理样品，只检测
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6楼2015-04-27 22:20:55
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是水货

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sytucom at 2015-04-27 09:22:37
我当时做电镜用的是石蜡切片。
第四个问题：完全可以放心，真空冷冻干燥温那么点有机溶剂完全没有问题。

你做的是什么样品的？第四个问题我会试试的，谢谢
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7楼2015-04-27 22:21:40
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下，并无新事

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
是水货: 金币+15, ★有帮助, 2 2015-06-12 13:06:04
引用回帖:
7楼: Originally posted by 是水货 at 2015-04-27 22:21:40
你做的是什么样品的？第四个问题我会试试的，谢谢...

我做的是苹果干，得用石蜡。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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已有的事，后必再有，已行的事，后必再行。
8楼2015-04-28 12:43:27
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是水货

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sytucom at 2015-04-28 12:43:27
我做的是苹果干，得用石蜡。
...

哦哦
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9楼2015-04-28 14:04:50
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