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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 组培真菌污染严重，求助啊
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夭夭无期J

新虫 (初入文坛)

[求助] 组培真菌污染严重，求助啊 已有2人参与

求各位高手帮忙啊，没法毕业啦在做樟科植物组织培养，实验材料有限，没有一年生的新枝条，用的学校的多年生枝条，污染较严重，主要是真菌，培养十天左右开始从外植体长白毛，目前处理方法为：预先用洗涤剂、清水冲洗，高锰酸钾浸泡一会儿，然后在无菌操作台上用75%酒精40-45s，无菌水6遍，升汞（滴了两滴吐温20）10min（升到15min菌依然长的茂盛），无菌水6遍,。有没有高手遇到过同样问题的啊？求解决方法啊~
有在培养基里直接加抑制真菌的药物什么的没，求名字和浓度啊。。各位帮帮忙啊
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1楼 2015-03-25 15:24:04
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czdmh

铁杆木虫 (小有名气)

新人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多年生母本本来真菌污染就多，你可以将枝条采下来后再培养箱萌发，期间可以间隔喷点抑菌剂，用新芽做效果可能会好些。
培养基里真菌抑制剂一般可以选择密霉胺、咪鲜胺、代森锰锌等，使用浓度1000~2000mg/l，但不推荐使用
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新人
2楼2015-03-26 10:15:53
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qwbio123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
您好，真菌抑制还是挺困难的，推荐你在培养基中添加一种ppm抑菌剂，这种抑菌剂既能抑制真菌又能抑制细菌，您可以了解一下，会对你的试验由帮助的，http://www.bioconsumable.com/cn/ ... 912098376454829.htm
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3楼2015-03-27 08:43:38
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wuyouguang

新虫 (小有名气)
植物组织培养高效抗污杀菌剂S106是一种长效、广谱、高活性、植物组织培专用防污染杀菌剂，本品具有用量少，使用方便，操作安全、配伍性好，其活性成分对环境无残留，不破坏培养基活性成分、耐高压灭菌、稳定性高、使用成本低等优点，可有效降低瓶苗废弃率，降低组培成本，提高组培效益。
一、使用方法
        1、S106母液的配制
先把S106B瓶白色粉末倒入小烧杯中。量取80ml左右去离子水，其中：用15ml左右去离子水倒入A瓶中，盖好摇荡使之溶解，倒入小烧杯中，余下的水多次摇荡洗涤AB瓶倒入小烧杯中，充分搅拌溶解，最后用无菌水定容至100毫升，瓶装低温贮藏。
        2、使用方法
        按启动、増殖、生根堷养基配方加入各种母液、琼脂、蔗糖、激素煮沸。每升培养基加入S106母液0.3毫升，充分搅拌均匀煮开，调PH后再进行分装。
二、注意事项
        1、A与B药剂不可分开使用，否则抗污染效果会降低。
        2、未使用完毕的混合母液可用冰箱冷藏1个月，并在上述期限内使用完，否则抗污染效果会降低。
        3、高浓缩植物组织培养高效抗污杀菌剂S106在未稀释情况下，避光、冷藏下保质期一年。并存放在儿童接触不到的地方。
        4、本品为植物组织培养专用药剂，不能用作人和动物的疾病消毒。
        5、培养基添加马铃薯、香蕉等有机物可能会影响抗污染效果，请先做梯度试验确定最佳用量后再应用。
        6、本复配杀菌剂为组培杀菌专用，其他方面不建议使用。
        有效期：建议在  年   月   日前使用。
        江西万年创新组培技术应用研究所
        联系电话：13014437761，QQ：694424085。
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4楼2015-05-15 18:34:28
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夭夭无期J

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by czdmh at 2015-03-26 10:15:53
多年生母本本来真菌污染就多，你可以将枝条采下来后再培养箱萌发，期间可以间隔喷点抑菌剂，用新芽做效果可能会好些。
培养基里真菌抑制剂一般可以选择密霉胺、咪鲜胺、代森锰锌等，使用浓度1000~2000mg/l，但不推 ...

谢谢你，现在有新枝条发出，用的新枝条，污染少了点，之前有试着添加真菌抑制剂，芽诱导率超低。。。。不过我诱导出的芽转接后不久就会枯黄死亡，即使转到不添加激素的空白培养基上也是这样，好不容易诱导出的芽都快死光了想问下你有这方面经验吗？能给点建议不？
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5楼2015-06-09 14:51:27
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czdmh

铁杆木虫 (小有名气)

新人
引用回帖:
5楼: Originally posted by 夭夭无期J at 2015-06-09 14:51:27
谢谢你，现在有新枝条发出，用的新枝条，污染少了点，之前有试着添加真菌抑制剂，芽诱导率超低。。。。不过我诱导出的芽转接后不久就会枯黄死亡，即使转到不添加激素的空白培养基上也是这样，好不容易诱导出的芽都 ...

这个在木本植物组培中较常见，不定芽连在母本上长势不错，切下来后就长不好了，建议用低浓度(0.05~0.1 mg/L)的植物生长调节剂，然后添加点LH，CH或香蕉粉之类的有机添加物，也可用少量活性炭试试，光照时间不要超过14h，强度不要太大，如果能成活，再交流
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新人
6楼2015-06-10 07:28:09
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