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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 杉木组培，污染非常严重，求助！
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shein2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 杉木组培，污染非常严重，求助！

新虫，求助各位，我正在做杉木的组织培养，材料是茎段，还有顶芽，但是外植体污染好严重啊，我用了很多方法，但是都没有明显的效果，哪位大神在做这方面的，请问我要怎么做才能最大限度的降低污染啊？急急急！
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1楼2012-04-20 15:50:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hzau2000zht

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
SongQ5285: 金币+3, 鼓励积极应助 2012-06-16 09:33:44
你先验证下，你的培养材料是否是内源性污染（内生菌），如果是内源性污染，表面消毒（无论你是用酒精、次氯酸钠、升汞、新洁尔灭等等，什么消毒时间，什么消毒强度都是浮云）无论如何都是搞不定的，材料被消毒剂杀死了，都不一定搞的定内生菌。如果是这种情况，建议你转换思路：一、承认带菌培养，但要压制污染程度，如向培养基中添加抗生素类、防腐剂类的药品（但前提是对植物伤害较少）。二、需找更洁净的外材部位，如茎尖。
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7楼2012-06-11 09:33:05
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shein2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 646800558 at 2012-04-23 11:15:07
可以在培养基中加入一定的抗生素，如硫酸链霉素、青霉素等，可以试试，我之前做实验时用过，有一定的效果。

谢谢！我最担心内生菌会产生抗药性，所以一直没敢用。
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9楼2012-06-15 22:17:02
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普通回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jhu132llh: 金币+1, 鼓励积极交流 2012-04-21 17:07:16
这样的情况最好使用顶芽进行重新培养，污染后很难完全去除干净，因为污染因素太多。
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2楼2012-04-20 17:21:30
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曾经遥远

银虫 (正式写手)
你说说都用了哪些方法了别人才好提建议
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选择了就不要放弃
3楼2012-04-20 19:35:04
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shein2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 曾经遥远 at 2012-04-20 19:35:04:
你说说都用了哪些方法了别人才好提建议

最开始我用了70%酒精1分钟，0.1%升汞10-14分钟，污染率基本是百分之百，后面我又试了在灭菌之前用多菌灵浸泡半小时，然后酒精消毒，再用次氯酸钠消毒10分钟，再用升汞消毒6-8分钟，但是污染都很严重，我都不知道该怎么办了，操作是没问题的，我转接材料就没污染。
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4楼2012-04-22 21:43:58
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gskekeai

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
SongQ5285: 金币+2, 鼓励积极回帖 2012-06-16 09:33:17
杉木茎段估计会比较难灭菌，试一下表面清理干净，洗涤剂水中浸泡2-3h，流水冲洗0.5-1h，酒精（75%）+次氯酸钠（5%，5-10min），时间你摸索下，升汞估计对芽敏感而且不易消除。
这个人感觉最好还是芽做外植体。也可参照上述流程。呵呵
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5楼2012-04-23 10:27:22
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646800558

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
SongQ5285: 金币+2, 鼓励积极回帖 2012-06-16 09:33:32
可以在培养基中加入一定的抗生素，如硫酸链霉素、青霉素等，可以试试，我之前做实验时用过，有一定的效果。
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6楼2012-04-23 11:15:07
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shein2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hzau2000zht at 2012-06-11 09:33:05
你先验证下，你的培养材料是否是内源性污染（内生菌），如果是内源性污染，表面消毒（无论你是用酒精、次氯酸钠、升汞、新洁尔灭等等，什么消毒时间，什么消毒强度都是浮云）无论如何都是搞不定的，材料被消毒剂杀死 ...

谢谢！很大部分都是内生菌污染，如果用抗生素的话，会不会在以后的培养中菌的耐药性增强了，又大规模爆发啊？这次我采的是今年萌发出来的嫩枝，表面清洗的时候，基本没什么灰尘，我再试试看效果如何，再向大家请教！
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8楼2012-06-15 22:15:51
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shein2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gskekeai at 2012-04-23 10:27:22
杉木茎段估计会比较难灭菌，试一下表面清理干净，洗涤剂水中浸泡2-3h，流水冲洗0.5-1h，酒精（75%）+次氯酸钠（5%，5-10min），时间你摸索下，升汞估计对芽敏感而且不易消除。
这个人感觉最好还是芽做外植体。也可 ...

之前我用的次氯酸钠，发现杉木茎段的褐化现象要比用升汞严重得多，我用的浓度是2%。表面清洗的时候不知道能不能用超声波清洗器呢？
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10楼2012-06-15 22:20:08
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