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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » HRP标记抗体的非特异性反应
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mafang68

金虫 (著名写手)

[求助] HRP标记抗体的非特异性反应 已有3人参与

本人做ELISA试剂盒研发，让别的公司定制的单抗并标记的HRP，现在问题就出在HRP标记抗体的非特异性反应上，先说说实验方法和结果
方法：目的蛋白、非目标蛋白、PBS包被；封闭；加HRP标记抗体反应；显色；检测OD值。

结果：1。与目的蛋白反应很低，OD值在0.2左右；非目标蛋白的反应较高，OD值在0.6左右。（此为同一次实验的检测结果）
2. 复检HRP标记抗体与非目标蛋白反应，OD值仍很高，0.7左右。
3. 另包被PBS，与HRP标记抗体温育，竟然也显色，而且很高，OD值在1.1左右。

以上结果，不知道怎么解释，或是哪步出了问题，与厂家沟通他们也不知怎么回事。希望各位虫友不吝赐教！非常感谢！
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木虫啦，哈哈
1楼 2015-03-19 15:23:33
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kongxiyang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mafang68: 金币+5, ★有帮助, 谢谢，我的封闭液用的就是BSA蛋白，而抗体稀释液要是加入蛋白俺以前的经验会增大OD值 2015-03-23 16:15:50
在封闭液或者抗体稀释液中加入一些蛋白，看能否消除干扰

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2楼2015-03-21 23:55:27
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hbl215

金虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mafang68: 金币+10, 谢谢，我挨个试试吧 2015-03-23 16:17:20
可能的问题：封闭时间不够，浓度不够
最可能的问题：HRP标记抗体特异性差，与目标蛋白OD值低是因为形成竞争了，换用其他物种的血清封闭再做一次。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-03-22 08:07:58
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lilyshuoxu
4楼2015-03-22 09:15:12
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haoziying

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
mafang68: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-04-20 09:41:58
1、PBS包被，有信号值，说明整个反应体系污染了，先把包被的所有东西都换掉，再试一次。
2、目的蛋白、非目标蛋白之间的关系，怎么理解有非目标蛋白有反应。
3、要确定定制的单抗筛选的标准，是否与目的蛋白进行反应及反应的亲和力，需要对方再次核实。
4、标记的时候，抗体的结构破坏了，造成非特异反应，
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5楼2015-03-24 00:24:10
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kongxiyang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
mafang68: 金币+63, ★有帮助, 5 2015-04-20 09:42:14
牛血清代替BSA试一下

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6楼2015-03-24 22:47:56
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