| 查看: 1070 | 回复: 17 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
【求助】蛋白含量测定
|
|||
|
请问： 用考马斯亮蓝法测商品酶的蛋白含量，结果不显色，吸光度为0，有谁知道请指教，谢谢。 [ Last edited by yusen_1982 on 2009-3-24 at 22:01 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
斑马鱼孵化求助
已经有0人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有23人回复
-
生物力学与组织工程学论文润色/翻译怎么收费?
已经有179人回复
-
生物学-微生物学-博士申请，有分子生物学、发酵工程、生物信息学等基础
已经有1人回复
-
悉尼大学 AMME 机械工程 双ARC Future Fellows团队招收CSC博士生
已经有30人回复
-
2026 法国csc 个人渠道招聘。计算机/生物信息/evolution/network优先
已经有0人回复
-
蛋白条带歪
已经有1人回复
-
金属离子与化合物分子对接
已经有1人回复
-
求助参苓白术口服液、肥儿口服液，儿康宁糖浆的质量标准！
已经有2人回复
-
香港中文大学医学院 诚聘 研究助理教授 (医工结合/生物信息学方向)
已经有21人回复
fenglianxiang
木虫 (著名写手)
WWE王中王HHH
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 2977.7
- 红花: 2
- 帖子: 1984
- 在线: 1.7小时
- 虫号: 250525
- 注册: 2006-05-13
- 性别: GG
- 专业: 应用化学轻化工助剂
2楼2008-06-11 09:06:56
l379989165
金虫 (正式写手)
水晶
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 544.7
- 帖子: 622
- 在线: 8.8小时
- 虫号: 352496
- 注册: 2007-04-22
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
★ ★
heavence007(金币+1,VIP+0):谢谢分享答案
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):回答很精彩，再奖，生物材料版期待您更多的参与！ 5-25 14:53
heavence007(金币+1,VIP+0):谢谢分享答案
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):回答很精彩，再奖，生物材料版期待您更多的参与！ 5-25 14:53
| 可以先检查一下试剂或仪器有没有问题了。操作如果也没失误的话应该不会有什么问题的。考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 |
3楼2008-06-11 13:49:12
4楼2008-06-11 19:41:00
5楼2009-03-24 19:19:36
无知3096
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2343.4
- 红花: 1
- 帖子: 141
- 在线: 413.8小时
- 虫号: 589938
- 注册: 2008-08-30
- 性别: GG
- 专业: 环境科学 nano
6楼2009-04-02 14:28:03
winter_gates
金虫 (正式写手)
生命过客
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1161.8
- 散金: 100
- 红花: 1
- 帖子: 615
- 在线: 20.4小时
- 虫号: 541629
- 注册: 2008-04-08
- 专业: 生物化学
7楼2009-04-02 16:33:31
winter_gates
金虫 (正式写手)
生命过客
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1161.8
- 散金: 100
- 红花: 1
- 帖子: 615
- 在线: 20.4小时
- 虫号: 541629
- 注册: 2008-04-08
- 专业: 生物化学
8楼2009-04-02 16:35:51
HarveyWang
捐助贵宾 (知名作家)
海外行者
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 2277.2
- 散金: 24
- 红花: 65
- 帖子: 6880
- 在线: 946小时
- 虫号: 528557
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2009-04-10 12:40:41
★ ★
wgcui(金币+0,VIP+0):欢迎讨论！ 4-21 08:51
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):谢谢回答，生物材料版期待您更多的参与！ 5-25 14:29
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):回答很精彩，再奖，生物材料版期待您更多的参与！ 5-25 14:54
wgcui(金币+0,VIP+0):欢迎讨论！ 4-21 08:51
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):谢谢回答，生物材料版期待您更多的参与！ 5-25 14:29
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):回答很精彩，再奖，生物材料版期待您更多的参与！ 5-25 14:54
|
可溶性总蛋白含量按Bradford [1]的方法进行测定，以牛血清蛋白为标准蛋白，测定不同标准蛋白浓度的A595值，做标准曲线，根据标准曲线计算未知蛋白的浓度。标准蛋白质溶液为1000μg／mL牛血清白蛋白：称取牛血清蛋白5mg，加水溶解并定容至5mL即可。考马斯亮蓝G-250溶液：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 90％乙醇中，加入100mL 85％(W／V)的磷酸，再用蒸馏水定容到1L，贮于棕色瓶中（常温下可保存一个月）。 取12支试管，分两组平行按照下表进行加样并测定595nm处的吸光度值，结果见表1。 表1 牛血清白蛋白标准曲线(OD)A595 Table1．Standard curve (OD) at A595 value with Bovine serum albumin 管号 1 2 3 4 5 6 BSA用量（ul） 0 10 20 30 40 50 水（ul) 500 490 480 470 460 450 考马斯亮蓝G 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 -250溶液（ml） A595 0 0.113 0.206 0.301 0.413 0.507 绘制标准曲线：以A595为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线图： |
10楼2009-04-21 00:47:24
