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lazyren

铁虫 (小有名气)

[求助] 向各位有经验者求助,提取DNA问题已有3人参与

除了白-4是外类群,其他均为同一属植物,其为灌木或乔木

实验方法是:
1.取样约0.02g,液氮研磨
2.CTAB 800微升+巯基乙醇15微升,65摄氏度温浴1小时
3.氯仿:异戊醇(24:1)洗两次,离心12000rpm,10分钟,轻摇乳化10分钟,冰浴15分钟
4.取上清,加入5M NaCl体积为上清1/5,  异丙醇(-20摄氏度)等体积加入(即上清+NaCl),冰冻3h,离心10000rpm,10分钟
5.冰冻的75%乙醇(-20摄氏度)洗两次,加500微升,离心10000rpm,10min,冰冻无水乙醇洗一次,加200微升,离心,晾干30分钟
6.TE加50微升+RNase(0.1mg/ml) 2微升,温浴37摄氏度 1小时

电泳
1%的琼脂糖凝胶,goldview 2微升/40微升TBE与琼脂糖混合液
70v,1.5h

以上,做了几次,感觉还是降解,请问有朋友能提点提点吗?

向各位有经验者求助,提取DNA问题
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lazyren

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-30 12:36:34
1.提取液改进
2.4步奏里面-20在20分钟以上

是指CTAB要重配?请问提取液还可以有哪些改进?
11楼2015-01-30 12:57:46
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Gin—红与黑

金虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2015-01-30 22:37:29
第一次见这样惨不忍睹的条带。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-01-30 10:38:14
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lazyren

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Gin—红与黑 at 2015-01-30 10:38:14
第一次见这样惨不忍睹的条带。。。。

求指导,我也不想惨不忍睹的说
3楼2015-01-30 10:48:42
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看了你的提取方案,可能你的提取方法需要改进。不知道这是否是成熟的提取方法?
4楼2015-01-30 11:16:33
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