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juliajuhoon

木虫 (小有名气)

[求助] 胰岛素 HPLC 已有1人参与

中国药典2010版的含量测定方法如下:
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10μm);0.2mol/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺调节pH值至2.3,加水至1000ml)-乙腈(74∶26)为流动相,柱温为40℃;检测波长为214nm。取系统适应性试验用溶液20μl(取胰岛素对照品,用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含40单位的溶液,室温放置至少24小时),注入液相色谱仪,记录色谱图,胰岛素峰和A21脱酰氨胰岛素峰之间的分离度应不小于1.8,拖尾因子应不大于1.8。
测定法  取本品适量,精密称定,用0.01mol/L盐酸溶液定量稀释制成每1ml中含40单位的溶液(临用新配,2~4℃保存,48小时内使用)。精密量取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另取胰岛素对照品适量,同法测定。按外标法以胰岛素峰面积与A21脱酰氨胰岛素峰(与胰岛素峰的相对保留时间约为1.2)面积之和计算,即得。

想问下(1)为何加乙醇胺调节PH?
            (2)0.2mol/L的硫酸盐缓冲液浓度是不是太大了?
我按药典配制了流动相,但是没有加乙醇胺,超声过滤后进行走基线,谁知一开泵走基线时管路就被堵上了。所以向大家求助。望各位大侠给予解惑!
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不抛弃不放弃
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温文不火

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1/调PH可以优化峰型
2/不大  不用怀疑、
管路堵了原因有很多啊,1可能管路原本就有问题,2流动相未过滤好,3流动相未混合均匀。
希望可以帮到你
2楼2016-02-26 14:02:02
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依依然然

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 温文不火 at 2016-02-26 14:02:02
1/调PH可以优化峰型
2/不大  不用怀疑、
管路堵了原因有很多啊,1可能管路原本就有问题,2流动相未过滤好,3流动相未混合均匀。
希望可以帮到你

亲,亲,请问你做经验胰岛素的液相是不是有经验呢,我这两天也是按照楼主的方法做的,但是除了溶剂峰之外就没有药峰,浓度也在检测限之上,为什么一直不出峰呢?如果您做过,告诉我一下您的流动相行不?液相新手,希望亲能够帮助谢谢谢谢
3楼2016-09-02 20:51:01
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依依然然

新虫 (初入文坛)

亲,您现在遇到的问题解决了没?我和你用的一样的方式,一直不出胰岛素的峰,求帮忙超级超级感谢
4楼2016-09-02 20:55:55
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