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zxt_0508

铜虫 (小有名气)

[求助] 血中浓度太低,检测不出,跪求原因

急求:我现在在做中药生物碱的血清药代,由于之前该药是做过药效的,我按照其给药剂量喂大鼠后测血清中的有效成分浓度,但发现都检测不出来,后来我就加大了剂量,做了5倍、10倍、15倍、20倍,但都检测不出来,按道理来讲的话,这么高的给药量不可能做不出来的,所以想请各位帮我分析下可能存在的原因。血清处理方法我用的是乙腈沉淀蛋白,用HPLC进行检测。谢谢各位老师,我是新手,所以还请给位给些详细的解答,再次感谢!
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谷牛牛

木虫 (著名写手)


karl2100: 金币+1, 谢谢! 2012-04-06 00:27:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by lanxun at 2012-04-05 23:42:43:
如果药物进入血清,没被检测到,就是检测方法的问题;如果没进入血清,则可能是药物被分解掉

这样的时候,我觉得先用纯水代替血浆配制一个同样浓度的低剂量的,看看是否能检测得到,再者用老鼠空白血配制样本,用同样的处理方法,看看能否检测出来。若用水的能检测出来,而血浆配制的不行,那应该是处理方法的回收率太低了或者在血浆中不稳定。若纯水配制都检测不出来,首先做全波长扫描,其次说明灵敏度不够,那就用液液萃取后浓缩进样!
4楼2012-04-06 00:18:16
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白水6177

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢应助! 2012-04-06 16:47:29
考虑问题应当考虑的全面:
首先要确保你的方法能检测到目标化合物,即专属性要过,保证各种干扰物不影响检测。
再就是预试验给药的采血点也很重要,在未知化合物的性质时,可以增加采血点,保证不同时间段的采血点都有,尽量密集一些。
不知道现在的方法学中标准曲线的范围能够检测到什么浓度,尽可能的提高检测灵敏度,毕竟楼主用的是HPLC。传统实验室方法的话可以用液液萃取氮气吹干富集后复溶检测。
6楼2012-04-06 11:49:36
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普通回帖

anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-04-05 17:05:56
换个甲醇试试,或者你的波长选择不对,药物进入血液中,会发生很多变化,建议你先做全波长扫描,还有可能就是这种药没有进入血清,或者,就是你的给药剂量低,在血清中显示不出来,原因很多,只能一个一个的排除
精益求精
2楼2012-04-05 10:39:12
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lanxun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢发言! 2012-04-06 00:27:41
如果药物进入血清,没被检测到,就是检测方法的问题;如果没进入血清,则可能是药物被分解掉
3楼2012-04-05 23:42:43
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20002504

至尊木虫 (知名作家)

文紋虫!

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢参与! 2012-04-06 16:47:16
没被检测到,就是检测方法的问题
走一条有历史痕迹的道路,也许才有“痕”!
5楼2012-04-06 00:19:01
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yyl09114429

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢参与! 2012-04-06 16:47:36
有可能你这个药被分解掉了,像酯类那种。
7楼2012-04-06 15:39:35
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

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1、药物降解
2、检测方法不可行
守候在风中的宁静。
8楼2012-04-06 16:48:20
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kkbyb

木虫 (著名写手)

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可以参考药效时的样品处理方法和检测条件。
9楼2012-04-06 17:08:55
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jiangdengz

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
你可以考虑先做个静脉注射,然后取血来检测,如果能测到,说明不是方法的问题,如果检测不到,就是你检测方法有问题,另外,生物碱类的样品极性比较大,在反相柱中很快会洗脱出来,可以用乙腈试一下,流动相中要加点弱碱,例如氨水,三乙胺等。
10楼2012-04-06 19:41:26
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