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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于two-step PCR
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于two-step PCR 已有3人参与

In this study, we used a two-step PCR protocol as previously described (19). With this approach, tags and adapters were added in a second round of PCR amplification. This method facilitates DNA amplification from complex biological samples (20), increases reproducibility, and recovers higher genetic diversity, avoiding the amplification bias that is introduced by using long fusion primers in one-step PCR amplification。
我是小白一个，这里面的tag 和adapter分别是什么意思啊？还有，最主要的:这个two-step PCR 是一个什么方法，能不能就具体讲一下，因为要向老师汇报这篇文章，但是对这个完全不了解啊，去哪里找找这方面的资料？
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1楼 2014-12-18 11:13:42
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Kobe君临天下: 金币+2, ★有帮助 2014-12-18 14:24:41
在本研究中，我们使用前面提到的两步PCR方法。这种方法，标签和适配器会添加在第二轮PCR扩增时。该方法促进复制的生物样本中的DNA扩增，增加再现性和恢复较高的遗传多态性，避免了此前介绍的用长融合引物的一步PCR扩增产生的扩增偏移。

tag：就是标签的意思，用来分辨你最后PCR的产物。
adapter：适配器，就是接头一样的东西。
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2楼2014-12-18 11:50:39
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
Kobe君临天下: 金币+2, ★有帮助 2014-12-18 14:26:14
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 11:50:39
在本研究中，我们使用前面提到的两步PCR方法。这种方法，标签和适配器会添加在第二轮PCR扩增时。该方法促进复制的生物样本中的DNA扩增，增加再现性和恢复较高的遗传多态性，避免了此前介绍的用长融合引物的一步PCR扩 ...

http://www.lifetechnologies.com/ ... wo-step-rt-pcr.html
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3楼2014-12-18 11:54:01
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 11:50:39
在本研究中，我们使用前面提到的两步PCR方法。这种方法，标签和适配器会添加在第二轮PCR扩增时。该方法促进复制的生物样本中的DNA扩增，增加再现性和恢复较高的遗传多态性，避免了此前介绍的用长融合引物的一步PCR扩 ...

能不能具体介绍一下two-step PCR呢？对这个不了解啊！
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4楼2014-12-18 14:26:02
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
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3楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 11:54:01
http://www.lifetechnologies.com/cn/zh/home/life-science/pcr/reverse-transcription/rt-pcr/one-two-step-rt-pcr.html...

恩，我也找到过这个比较，不过能不能简要地介绍一下呢？和这联系起来。
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5楼2014-12-18 14:27:35
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
另外，molecular proxy是什么意思？
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6楼2014-12-18 14:49:55
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
Kobe君临天下: 金币+1, ★有帮助 2014-12-18 16:02:43
引用回帖:
6楼: Originally posted by Kobe君临天下 at 2014-12-18 14:49:55
另外，molecular proxy是什么意思？

像这种专用名词，你肯定要联系上下文看的，还有
In this study, we used a two-step PCR protocol as previously described (19)。
上面那个19在原文附录处肯定可以找到，去找来看就知道了
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7楼2014-12-18 15:24:21
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
Kobe君临天下: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-12-18 16:29:23
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-19 23:37:40
引用回帖:
4楼: Originally posted by Kobe君临天下 at 2014-12-18 14:26:02
能不能具体介绍一下two-step PCR呢？对这个不了解啊！...

那我就简单讲一下我知道的，通常我们说两步pcr和三步pcr，是根据
PCR的变性、退火、延伸来分。而两步PCR就是只有变性和退火延伸两个步骤。
而你这文章所指的应该是RT-PCR，虽然你截取的部分没出现这词，但是看了一下就是指这个。
其中一步RT-PCR就是反转录和pcr扩增在同一管中同时进行，样本量足的时候可以这样做。
两步RT-PCR就是分开，先逆转录，然后再加引物和其他东西进行PCR扩增反应，这样可以减少不必要的扩增产物（就是扩增偏移）。
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8楼2014-12-18 15:44:59
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 15:24:21
像这种专用名词，你肯定要联系上下文看的，还有
In this study, we used a two-step PCR protocol as previously described (19)。
上面那个19在原文附录处肯定可以找到，去找来看就知道了...

这个词是在摘要的最后面出现的，文章中出现的次数也比较少，作用好像是监测微生物的。。。
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9楼2014-12-18 16:01:51
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 15:44:59
那我就简单讲一下我知道的，通常我们说两步pcr和三步pcr，是根据
PCR的变性、退火、延伸来分。而两步PCR就是只有变性和退火延伸两个步骤。
而你这文章所指的应该是RT-PCR，虽然你截取的部分没出现这词，但是看了 ...

谢谢你，我刚刚看了一下那篇参考文献，并没有具体讲，只是操作方法和这篇文章里基本一样，你的回答很好，这样再去了解也有个方向了，之前直接搜感觉好多没有用的东西啊。
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10楼2014-12-18 16:31:28
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