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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于two-step PCR
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bbqlhb

木虫 (小有名气)
楼主你要结合上下文看呢，我觉得两步PCR只是个笼统的概念，下次发问要把原文也发上来。。
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11楼2014-12-18 16:34:04
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 16:34:04
楼主你要结合上下文看呢，我觉得两步PCR只是个笼统的概念，下次发问要把原文也发上来。。

原文太长了，所以没粘上来。。。
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12楼2014-12-18 21:08:47
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 16:34:04
楼主你要结合上下文看呢，我觉得两步PCR只是个笼统的概念，下次发问要把原文也发上来。。

刚才看了一下RT-PCR，发现和这里的不一样啊，这里是直接用提取出来的DNA进行的扩增，只不过是分了两步，并不是用RNA进行的逆转录啊。。。
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13楼2014-12-18 21:49:48
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-18 16:34:04
楼主你要结合上下文看呢，我觉得两步PCR只是个笼统的概念，下次发问要把原文也发上来。。

额额，不好意思，The first PCR amplification was performed using the modified primers 341F (CCTAYGGGRBGCASCAG) and 806R (GGACTACNNGGGTATCTAAT) (20) to amplify a 466-bp fragment of the 16S rRNA gene flanking the V3 and V4 regions. The PCR mix (40 l) contained 1Phusion HF buffer containing 2.5 mM MgCl2 (Finnzymes, Vantaa, Finland),0.2mMdeoxynucleoside triphosphate (dNTP) mixture, 0.8UPhusion hot start DNA polymerase, 2 M each primer, 25 g bovine serum albumin (BSA; molecular grade, 10 mg ml1 stock), and 1 l template.先是扩增的16S rRNA，然后用这个DNA进行的第二轮扩增，应该就是RT-PCR了吧。。。
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14楼2014-12-18 21:56:12
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Kobe君临天下: 金币+1, ★有帮助 2014-12-19 08:59:19
有一种两步法PCR是将第一步PCR产物做模板，进行第二次PCR。如果你不会上传全文，把链接贴上也行。否则象在玩猜猜猜......
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慎思明辨博学笃行
15楼2014-12-19 06:20:17
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by guoliwang at 2014-12-19 06:20:17
有一种两步法PCR是将第一步PCR产物做模板，进行第二次PCR。如果你不会上传全文，把链接贴上也行。否则象在玩猜猜猜......

能不能具体说一下呢？这种方法有什么好处吗？文章是老师给的，所以不清楚链接，题目是Impact of Long-Term Diesel Contamination on Soil Microbial Community Structure。
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16楼2014-12-19 08:59:02
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再闹不给糖

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Kobe君临天下: 金币+1, ★有帮助 2014-12-20 12:46:54
楼主可以百度一下重叠pcr，希望对你有帮助
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天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过
17楼2014-12-19 22:55:31
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Kobe君临天下

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 再闹不给糖 at 2014-12-19 22:55:31
楼主可以百度一下重叠pcr，希望对你有帮助

恩，好的，谢谢！

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18楼2014-12-20 12:47:14
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