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Kobe君临天下铁杆木虫 (著名写手)
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关于two-step PCR 已有3人参与
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In this study, we used a two-step PCR protocol as previously described (19). With this approach, tags and adapters were added in a second round of PCR amplification. This method facilitates DNA amplification from complex biological samples (20), increases reproducibility, and recovers higher genetic diversity, avoiding the amplification bias that is introduced by using long fusion primers in one-step PCR amplification。 我是小白一个，这里面的tag 和adapter分别是什么意思啊？还有，最主要的:这个two-step PCR 是一个什么方法，能不能就具体讲一下，因为要向老师汇报这篇文章，但是对这个完全不了解啊，去哪里找找这方面的资料？ |
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Kobe君临天下
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额额，不好意思，The first PCR amplification was performed using the modified primers 341F (CCTAYGGGRBGCASCAG) and 806R (GGACTACNNGGGTATCTAAT) (20) to amplify a 466-bp fragment of the 16S rRNA gene flanking the V3 and V4 regions. The PCR mix (40 l) contained 1Phusion HF buffer containing 2.5 mM MgCl2 (Finnzymes, Vantaa, Finland),0.2mMdeoxynucleoside triphosphate (dNTP) mixture, 0.8UPhusion hot start DNA polymerase, 2 M each primer, 25 g bovine serum albumin (BSA; molecular grade, 10 mg ml1 stock), and 1 l template.先是扩增的16S rRNA，然后用这个DNA进行的第二轮扩增，应该就是RT-PCR了吧。。。 |
14楼2014-12-18 21:56:12
bbqlhb
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2楼2014-12-18 11:50:39
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3楼2014-12-18 11:54:01
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4楼2014-12-18 14:26:02
