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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于酵母筛库的疑问
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ft3049527

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于酵母筛库的疑问 已有2人参与

最近在做酵母筛库, 诱饵蛋白转的是AH109菌株, 文库是公司做的Y187酵母菌株. 诱饵蛋白转化了AH109后, 酵母的生长速率明显变慢,无论是在平板上还是用SD/-Trp液摇菌的过程中。

用SD/-Trp液摇转化了诱饵蛋白菌株的酵母，用了26个小时，挑的还不仅仅是但菌落，才摇到OD600值0.6，然后进行了酵母接合生殖，接合生殖20h后有观察到酵母成功接合的现象。

在酵母接合生殖后，涂在SD/-Leu板上的酵母2天就长出菌落，但是涂SD/-Trp板上的酵母4天后才长出较小的菌落，涂二缺板的除了稀释1/10平板上长了一个菌落,其他都暂时未能长菌落。四缺板上也暂时没有酵母菌落长出。

希望有这方面经验的大牛来解答一下疑问，如果我的目的蛋白对酵母生长有一定的抑制作用，还可以这么做吗？ 另外，我的AH109酵母菌株长得菌落直径最大也在5mm, 而这次涂SD/-Leu的Y187菌落有直径在1CM以上的菌落，这样正常吗？

酵母文库筛选的方法是按照clonetech的指导进行实验的。
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1楼 2014-12-17 11:24:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-19 15:03:39
你没有做诱饵菌株毒性测试吧，这个是必须的

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-12-17 15:19:13
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-19 15:03:44
诱饵蛋白对酵母有毒性，这个说明书上都有写的
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3楼2014-12-19 10:26:19
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ft3049527

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-12-17 15:19:13
你没有做诱饵菌株毒性测试吧，这个是必须的

我试过几次，有时候摇的到1.2，这次差一点。毒性除了影响生长外，还会怎如何影响酵母的接合生殖呢？从我涂-Trp板的菌落数量来看，应该不是菌数量不够的问题。
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4楼2014-12-19 10:35:08
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ft3049527

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 李小同 at 2014-12-19 10:26:19
诱饵蛋白对酵母有毒性，这个说明书上都有写的

所以呢？就不能做了？
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5楼2014-12-19 10:35:25
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李小同

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ft3049527 at 2014-12-19 10:35:25
所以呢？就不能做了？...

按照标准步骤上来说，有毒性是肯定不行的，你可以打电话去clonetech的技术支持那里问一下，有没有什么解决办法
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6楼2014-12-19 14:26:46
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dqff353

新虫 (初入文坛)
学习了
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7楼2015-04-07 11:11:56
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刁进进

木虫 (初入文坛)
请问您有酵母Y187的和AH109菌株吗？我最近想做点酵母双杂的实验，可以给我一些吗？或者跟您购买也行。
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8楼2015-11-20 15:40:13
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