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clark_albert

木虫 (著名写手)

[求助] 请教质谱试剂及多级质谱母离子问题 已有1人参与

问题有二,
1,大家用的诸如甲酸、乙酸、乙酸铵都是什么级别的,普通分析纯还是色谱纯,或者是质谱级的?
2,我的多级质谱,每一级都会得到一个母离子+1的峰,比如,我对500的母离子做多级,无论该母离子带多少个电荷、带什么电荷,都会得到一个501的峰,如果碰撞能量高,那可能都打没了,如果稍低一些(保留一部分母离子),就会有这样的状况,如果能量再低,得到500的母离子,碎裂就相当少了,我做的分子是多肽,用的He CID,不知道这个正不正常?
谢谢大家指教
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
clark_albert: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-12-15 16:30:20
1. 必须用HPLC grade
2. 501那是[M+H]的峰,结合了一个氢离子所以质量数+1,这是软电离最常出现的峰。你要做多级就打碎501,打碎500不会得到合理的结果。碰撞能量越高母离子越低。论坛里有好多质谱方面的资料你可以看看。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
2楼2014-12-15 14:07:19
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clark_albert

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2014-12-15 14:07:19
1. 必须用HPLC grade
2. 501那是的峰,结合了一个氢离子所以质量数+1,这是软电离最常出现的峰。你要做多级就打碎501,打碎500不会得到合理的结果。碰撞能量越高母离子越低。论坛里有好多质谱方面的资料你可以看看 ...

确实,如果我的目标是500,我在一级拿到一个[500+1]+这就毋庸置疑了,但是每一级都如此,比如我1级质谱里头挑出了[M+H]=500这个峰(就以带一个电荷为例,叫做“500+”)来做2级,就会出现“501+”,在这下面挑出“355+”做三级,会出现“356+”,四级也是一样,我开始考虑的是[M+H]+与一个H自由基的结合,但是我没找到相关的文献支持,您是这个意思吗?谢谢
3楼2014-12-15 15:00:31
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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3楼: Originally posted by clark_albert at 2014-12-15 15:00:31
确实,如果我的目标是500,我在一级拿到一个+这就毋庸置疑了,但是每一级都如此,比如我1级质谱里头挑出了=500这个峰(就以带一个电荷为例,叫做“500+”)来做2级,就会出现“501+”,在这下面挑出“355+”做三级 ...

M+H是500还是501?你做二级的时候就打碎M+H不要管M
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
4楼2014-12-15 15:03:25
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clark_albert

木虫 (著名写手)

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2楼: Originally posted by archbishop at 2014-12-15 14:07:19
1. 必须用HPLC grade
2. 501那是的峰,结合了一个氢离子所以质量数+1,这是软电离最常出现的峰。你要做多级就打碎501,打碎500不会得到合理的结果。碰撞能量越高母离子越低。论坛里有好多质谱方面的资料你可以看看 ...

另外再确认一下,我的乙酸铵是做质谱做pH缓冲,不过液相,是不需要MS级的吧?谢谢
5楼2014-12-15 15:03:37
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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5楼: Originally posted by clark_albert at 2014-12-15 15:03:37
另外再确认一下,我的乙酸铵是做质谱做pH缓冲,不过液相,是不需要MS级的吧?谢谢...

如果你做LC-MS就用色谱纯(HPLC grade),如果只是做液相可以用分析纯,但是最好还是色谱纯,因为HPLC grade这个名字字面就包含了高效液相。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
6楼2014-12-15 15:08:42
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clark_albert

木虫 (著名写手)

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4楼: Originally posted by archbishop at 2014-12-15 15:03:25
M+H是500还是501?你做二级的时候就打碎M+H不要管M...

M+H是500,但是我选出来做多级的母离子未必会是M+H,也可能是别的,可能我表达不太清楚,假设我选出峰N作为母离子做多级质谱,我们都会留下一部分这个母离子峰的信号,5%左右,但是,无论这个离子带多少电荷,在做了CID以后,只要碰撞能量足够,N的信号会消失,而出现N+1的一个信号,电荷与N所带的电荷相同,如果CID的能量调节更大,则N+1也被打掉,偶尔可以得到一个比较强的N+1的峰,我打这个峰拿来打过一次,得到的碎片跟N得到的碎片相比就是N的碎片+1就是N+1的碎片了。我表示不太理解这个问题,之前实验室的前辈们也是说是加氢的,但是都没谁说清楚了,就说默认是母离子就可以了,但我的疑问是这个电荷不变的N+1峰即使加氢也该加的是H自由基才对,但是我找不到相关的理论解释。另外,您那边用的试剂是哪个品牌的,是sigma还是国内的aladdin这些?同级的试剂,aladdin的价格比sigma便宜了近10倍,而且LC-MS级的乙酸铵比sigma便宜了近20倍。
7楼2014-12-15 15:17:31
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archbishop

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7楼: Originally posted by clark_albert at 2014-12-15 15:17:31
M+H是500,但是我选出来做多级的母离子未必会是M+H,也可能是别的,可能我表达不太清楚,假设我选出峰N作为母离子做多级质谱,我们都会留下一部分这个母离子峰的信号,5%左右,但是,无论这个离子带多少电荷,在做 ...

1. 你还是发个图来看看吧
2. 我们用的是sigma的,没有那么大的差价
https://www.sigmaaldrich.com/cat ... h&region=CN
https://www.aladdin-e.com/product/A112060
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
8楼2014-12-15 15:26:40
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clark_albert

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8楼: Originally posted by archbishop at 2014-12-15 15:26:40
1. 你还是发个图来看看吧
2. 我们用的是sigma的,没有那么大的差价
https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/fluka/73594?lang=zh&region=CN
https://www.aladdin-e.com/product/A112060...

刚刚就在找,但是我之前都是把母离子打得快看不见了才存图,好不容易找了这个。这个母离子是834,负离子模式,[M-H],打过之后,834变弱,增加能量,834没了,出835,再大出了836,因为chemdraw得到的[M-H]的同位素峰也就是834,835,836,这个总不能是这三个的碎裂能量不同吧?但是一般也就是打M'=836,得M'+1=837,得到[M'+2]=838这种就不多,这种就直接打到几乎魂飞魄散了的。
我刚看的就是这俩,一个25g75,一个25g1200,表示很忧伤,老板总是希望节约银子,我上周磨了半天老板还在问我平时用的AR的试剂影响到我什么实验结果了。
请教质谱试剂及多级质谱母离子问题
123.png

9楼2014-12-15 15:35:57
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archbishop

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9楼: Originally posted by clark_albert at 2014-12-15 15:35:57
刚刚就在找,但是我之前都是把母离子打得快看不见了才存图,好不容易找了这个。这个母离子是834,负离子模式,,打过之后,834变弱,增加能量,834没了,出835,再大出了836,因为chemdraw得到的的同位素峰也就是8 ...

那个不是75是795.
834的二级图有吗?
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
10楼2014-12-15 15:40:11
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