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载体构建 已有4人参与
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| 请问虫友们，在构建重组载体时，拿到原始环状质粒，除了要看酶切位点，还要考虑什么问题？请具体说说，谢谢！！！！！！！！！！！！！！跪求 |
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xzy0425(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:57:19
xzy0425(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:57:19
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不是去找书，而是要去仔细阅读你想使用的那个载体的厂家说明书。有时厂家会给一个简短版本的说明，内有载体图谱，抗性，酶切位点，质粒骨架主要构成等，这些信息对于熟手来说，足够了（例如GE公司的pGEX系列）。但是除此以外，还会有一个比较详细的操作说明叫"Manual"或者"protocol"，可以去质粒生产厂家的官方网站下载，或者用谷歌搜索到，里面会有很详细的信息，甚至包括质粒构建，转化，保种等一系列操作信息，一般是英文版本。楼主如果真要做好实验，请务必好好学习这个说明书，特别是没有师兄或者师姐教你的时候，恕我直言，光靠论坛上大家的解释，还是可能会有疏漏的。 2. 首先看看这个载体是不是你所需要的，例如是真核、还是原核。 3. 看看是什么启动子，你所选的宿主或者表达菌株（细胞）是否有相应的转录因子识别这个启动子 4. 看看是什么抗性，这个和质粒扩增，重组子或稳定株筛选有关 5. 看看有什么酶切位点，你需要用软件分析你要插入的DNA的序列，最后选定使用的酶切位点不能出现在你的插入基因序列中。 6. 看看还有什么其他注意事项。 7. 大家补充…… |
9楼2014-12-03 21:32:16
10楼2014-12-04 09:40:39
yuguiyan
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