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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 载体构建
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xzy0425

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体构建 已有4人参与

请问虫友们，在构建重组载体时，拿到原始环状质粒，除了要看酶切位点，还要考虑什么问题？请具体说说，谢谢！！！！！！！！！！！！！！跪求
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1楼 2014-12-02 19:04:55
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wushm388

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by coolkid2001 at 2014-12-03 21:32:16
不是去找书，而是要去仔细阅读你想使用的那个载体的厂家说明书。有时厂家会给一个简短版本的说明，内有载体图谱，抗性，酶切位点，质粒骨架主要构成等，这些信息对于熟手来说，足够了（例如GE公司的pGEX系列）。但 ...

讲的很不错。
补充一下：7. 分泌表达还是胞内表达？
8. 带标签吗？是何标签。
正如楼上几位所述，对于熟手来说，有质粒图的信息就足够了，新手的话，找一个内行人指点指点，很快就能入门的，并不很难。告诉人家你要表达什么基因？目的是什么？等等，内行人指点指点，你就都明白了。
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10楼2014-12-04 09:40:39
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 19:25:15
看是否有标签，结合你的实验目的看需要如何设计实验

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-12-02 19:23:06
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coolkid2001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-12-04 19:25:44
载体抗性。
另外，像pcDNA3.1这种真核表达载体，如果基因起始位置满足kozak序列规则，蛋白翻译效率会显著提高。
每个载体都有其说明书的，建议楼主仔细阅读。
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一入江湖岁月催
3楼2014-12-02 21:46:05
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wushm388

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 19:26:01
质粒图，最好有目的基因序列。用之前双酶切实验检验，然后就可以进行后续实验了。
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4楼2014-12-03 14:26:59
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