应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 载体构建
51/1返回列表
查看: 1351  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xzy0425

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体构建 已有4人参与

请问虫友们，在构建重组载体时，拿到原始环状质粒，除了要看酶切位点，还要考虑什么问题？请具体说说，谢谢！！！！！！！！！！！！！！跪求
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-12-02 19:04:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coolkid2001

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
xzy0425(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:57:19
引用回帖:
6楼: Originally posted by xzy0425 at 2014-12-03 19:00:20
很多书上给的质粒图谱除了质粒名称、质粒大小、抗性编码区、一些表示位置的数字外，就差不多就剩酶切位点分布了，我不知道该怎么做？不知道下一步到底该先做什么，该如何完成实验？跪求详细说明啊: ...

不是去找书，而是要去仔细阅读你想使用的那个载体的厂家说明书。有时厂家会给一个简短版本的说明，内有载体图谱，抗性，酶切位点，质粒骨架主要构成等，这些信息对于熟手来说，足够了（例如GE公司的pGEX系列）。但是除此以外，还会有一个比较详细的操作说明叫"Manual"或者"protocol"，可以去质粒生产厂家的官方网站下载，或者用谷歌搜索到，里面会有很详细的信息，甚至包括质粒构建，转化，保种等一系列操作信息，一般是英文版本。楼主如果真要做好实验，请务必好好学习这个说明书，特别是没有师兄或者师姐教你的时候，恕我直言，光靠论坛上大家的解释，还是可能会有疏漏的。
2. 首先看看这个载体是不是你所需要的，例如是真核、还是原核。
3. 看看是什么启动子，你所选的宿主或者表达菌株（细胞）是否有相应的转录因子识别这个启动子
4. 看看是什么抗性，这个和质粒扩增，重组子或稳定株筛选有关
5. 看看有什么酶切位点，你需要用软件分析你要插入的DNA的序列，最后选定使用的酶切位点不能出现在你的插入基因序列中。
6. 看看还有什么其他注意事项。
7. 大家补充……
赞一下(4人) 回复此楼
一入江湖岁月催
9楼2014-12-03 21:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 19:25:15
看是否有标签，结合你的实验目的看需要如何设计实验

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-12-02 19:23:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coolkid2001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-12-04 19:25:44
载体抗性。
另外，像pcDNA3.1这种真核表达载体，如果基因起始位置满足kozak序列规则，蛋白翻译效率会显著提高。
每个载体都有其说明书的，建议楼主仔细阅读。
赞一下 回复此楼
一入江湖岁月催
3楼2014-12-02 21:46:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wushm388

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 19:26:01
质粒图，最好有目的基因序列。用之前双酶切实验检验，然后就可以进行后续实验了。
赞一下 回复此楼
4楼2014-12-03 14:26:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭