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nrcy1987

新虫 (初入文坛)

[求助] EMSA的大侠们~~~ 已有1人参与

亲们，有没有做过EMSA得到了这样的结果？随着蛋白增多shift的条带越来越慢，请问是蛋白加多了的副作用吗？使原本不能结合的DNA结合了？我蛋白加了很多。（正常来说shift的条带在同一水平线上）
Lane1是没加蛋白的，Lane2~7是加的蛋白越来越多，lane8是加了unlabelled competitor，lane9是加了不相关的蛋白做control。多谢啦！！！文献里没见过这样的情况，如果哪位大侠知道如何解释，望赐教！

EMSA的大侠们~~~
pilG.jpg
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1楼 2014-11-23 03:58:08
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-23 13:21:27
nrcy1987: 金币+1, ★有帮助 2014-11-24 13:39:45
可能是你的蛋白形成了多聚体
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2014-11-23 06:23:37
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nrcy1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-23 06:23:37
可能是你的蛋白形成了多聚体

谢谢你的回复~ 还想再问一下，请问这种情况是因为蛋白加的太多了嘛？这个蛋白我做了很多次，和别的DNA probe结合没有出现过这种情况，shift band都在同一位置。只有这个probe。。。这个probe和蛋白结合效率非常低，我就加了很多很多蛋白，请问是这个原因吗？多谢了大侠！！
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3楼2014-11-23 16:53:31
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悠悠米

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nrcy1987 at 2014-11-23 16:53:31
谢谢你的回复~ 还想再问一下，请问这种情况是因为蛋白加的太多了嘛？这个蛋白我做了很多次，和别的DNA probe结合没有出现过这种情况，shift band都在同一位置。只有这个probe。。。这个probe和蛋白结合效率非常低， ...

你好，我的情况跟你的一样呢，请问你找到原因了吗，我的蛋白几乎所有的探针都是这个样子，还有你的蛋白浓度一般控制在多少um呢，文献有报道这个蛋白会形成二聚体
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4楼2015-11-30 12:28:01
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青秧flying

新虫 (初入文坛)
是不是非特异性结合？因为用了竞争探针以后就直接没有结合条带了。我现在做的蛋白浓度一高就直接堵在上样孔上下不来了。
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5楼2016-03-16 20:04:06
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