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a皑雪c

银虫 (正式写手)

[求助] 液相和液质中标品和样品溶剂不同出峰时间和面积的问题

是测大鼠脑中神经递质的,我现在有20多种标品,有几个混标是用甲醇溶解的1mg/mL的,其他都是固体。看到一篇文献用的是waters的 Atlantis C18柱,流动相是乙腈和千分之一甲酸,他用的是乙腈-水溶液溶解的标品,做的标曲。
我看了许多文献,脑组织样品加含0.01%的EDTA-2Na的0.1mol/L的高氯酸匀浆,离心沉淀蛋白之后直接进样测定。标品有的是用水有的是用高氯酸溶解的,那么这几种样品和标品的出峰时间和面积应该会有不同吧。再者,高氯酸的pH应该很低吧,直接进样不会坏柱子吗?
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

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a皑雪c: 金币+40, ★★★很有帮助 2014-11-18 20:54:32
神经递质我做过,用水匀浆就行了,加其他的东西并不能得到更好的结果。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
5楼2014-11-18 18:47:23
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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引用回帖:
6楼: Originally posted by a皑雪c at 2014-11-18 20:58:34
请问你试过那种加高氯酸的方法么,还有加千分之一甲酸的。你是测的几种神经递质呢?样品用水匀浆,标品也得用水?流动相是什么呢...

流动相用千分之一的甲酸水和千分之一的甲酸乙腈。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
8楼2014-11-18 21:18:32
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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引用回帖:
9楼: Originally posted by a皑雪c at 2014-11-18 21:54:41
非常感谢你的回复!
我还有好多疑问。正如你说,用水匀浆,然后再加有机溶剂沉淀蛋白质,离心之后水和有机溶剂不会分层吧,有机溶剂应该是甲醇或者乙腈?那这样样品最后的溶剂是水和有机溶剂的混合液?那标 ...

水可以和甲醇、乙腈互溶。样品最后的溶剂水占的比例小,沉淀剂比例高。标品要加到空白组织里一起匀浆,同样的处理方法。你用什么溶都无所谓因为占的比例很小。不同位置肯定有差异,看你实验的目的了,假如只是测平均浓度就用整个海马组织。

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雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
10楼2014-11-18 22:08:08
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匿名

用户注销 (正式写手)

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2楼2014-11-18 13:00:54
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a皑雪c

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 植物资源 at 2014-11-18 13:00:54
我不知道呀,我没做过这方面的


感觉好多问题啊,液相一点都不懂
3楼2014-11-18 13:11:37
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ashlink

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
a皑雪c: 金币+25, ★★★很有帮助 2014-11-18 20:55:49
C18柱偏酸性,而且进样量很少,和流动相一起经过柱子,酸性也低不了太多,对柱子影响不大。使用完,记得把柱子冲好就行。
疯狂骑士带着他最心爱的黄衣小伙伴再次点亮天空,拯救了世界
4楼2014-11-18 13:32:50
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a皑雪c

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by archbishop at 2014-11-18 18:47:23
神经递质我做过,用水匀浆就行了,加其他的东西并不能得到更好的结果。

请问你试过那种加高氯酸的方法么,还有加千分之一甲酸的。你是测的几种神经递质呢?样品用水匀浆,标品也得用水?流动相是什么呢
6楼2014-11-18 20:58:34
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by a皑雪c at 2014-11-18 20:58:34
请问你试过那种加高氯酸的方法么,还有加千分之一甲酸的。你是测的几种神经递质呢?样品用水匀浆,标品也得用水?流动相是什么呢...

乙酰胆碱,多巴胺,5-HT。高氯酸是强酸,还有氧化性,最好不要加,甲酸可以试试。标品也和样品同样处理,匀浆完了要沉淀蛋白质,肯定是用有机溶剂,最后的溶剂不是水。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
7楼2014-11-18 21:17:28
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a皑雪c

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by archbishop at 2014-11-18 21:17:28
乙酰胆碱,多巴胺,5-HT。高氯酸是强酸,还有氧化性,最好不要加,甲酸可以试试。标品也和样品同样处理,匀浆完了要沉淀蛋白质,肯定是用有机溶剂,最后的溶剂不是水。...

非常感谢你的回复!
我还有好多疑问。正如你说,用水匀浆,然后再加有机溶剂沉淀蛋白质,离心之后水和有机溶剂不会分层吧,有机溶剂应该是甲醇或者乙腈?那这样样品最后的溶剂是水和有机溶剂的混合液?那标品用什么溶剂溶解呢?我的标品有的是用甲醇溶解的混标   
取样品匀浆时取一小部分,取的部位不同会不会结果差别很大,比如说取海马组织时只取其中一小部分
9楼2014-11-18 21:54:41
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