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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 快要疯掉了，这是啥条带呀？
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040205001

新虫 (小有名气)

[求助] 快要疯掉了，这是啥条带呀？ 已有4人参与

如图，被PCR折腾的快要疯了，哪位大神解释一下，到底这是什么情况？

快要疯掉了，这是啥条带呀？
20141110.jpg
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1楼 2014-11-10 16:23:58
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 18:06:43
你得解释解释具体是什么状况啊，怎么第一泳道看着似乎是maker？
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2楼2014-11-10 16:40:26
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小花猫阿

新虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 18:06:50
你照胶的时都放反了啊，亲。mark不清晰，然后要测的东西没跑出来
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3楼2014-11-10 17:07:35
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你什么情况啊，搞一个白板，不说别的，单看你的Marker，即使你能P出来目的带，就这块胶来看，也不会有显示的，请重新做一块，不管目的条带有没有，最起码保证Marker清晰可见，这是最起码的科学素养。而且你们那里拍照都是头朝下拍的吗，...第一次做胶啊
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4楼2014-11-11 09:36:13
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040205001

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-11-10 16:40:26
你得解释解释具体是什么状况啊，怎么第一泳道看着似乎是maker？

最近在筛选合适的微卫星引物，引物序列是在别人的文献中找到的。是的，第一泳道是marker，胶是琼脂糖凝胶，扩增的是大概200多bp的片段，P了好多次都出不来条带，不知道怎么回事，感觉Marker都不清楚，而且也没有分开似得，不知道该怎么办了。由于DNA的纯化是从粪便中提取的，所以不知道是因为模板太低还是扩增的温度不对，真的很烦。
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5楼2014-11-18 12:50:31
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040205001

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yabxxh at 2014-11-11 09:36:13
你什么情况啊，搞一个白板，不说别的，单看你的Marker，即使你能P出来目的带，就这块胶来看，也不会有显示的，请重新做一块，不管目的条带有没有，最起码保证Marker清晰可见，这是最起码的科学素养。而且你们那里拍 ...

最近在筛选合适的微卫星引物，引物序列是在别人的文献中找到的。是的，第一泳道是marker，胶是琼脂糖凝胶，扩增的是大概200多bp的片段，P了好多次都出不来条带，不知道怎么回事，感觉Marker都不清楚，而且也没有分开似得，不知道该怎么办了。由于DNA的纯化是从粪便中提取的，所以不知道是因为模板太低还是扩增的温度不对，真的很烦。
您说的就这块胶看，也不会有显示是什么意思？胶做的不行？我是第一次做分子方面的东西，师兄师姐又没有做的，老师也不会这方面的东西，愁。
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6楼2014-11-18 12:58:23
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040205001

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-11-10 16:40:26
你得解释解释具体是什么状况啊，怎么第一泳道看着似乎是maker？

最近在筛选合适的微卫星引物，引物序列是在别人的文献中找到的。是的，第一泳道是marker，胶是琼脂糖凝胶，扩增的是大概200多bp的片段，P了好多次都出不来条带，不知道怎么回事，感觉Marker都不清楚，而且也没有分开似得，不知道该怎么办了。由于DNA的纯化是从粪便中提取的，所以不知道是因为模板太低还是扩增的温度不对，真的很烦。唉。
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7楼2014-11-18 12:58:45
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chenaihuatc

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你这块胶质量很差呀，看起来不均匀的样子，连marker都跑不好。
建议重新配胶吧，多配几个浓度，1.0%，1.5%，2.0%都试试，胶溶后拿出来混匀再放进去煮沸一次，胶槽洗净擦干。至少要先保证把marker跑出来吧！
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8楼2014-11-18 20:07:27
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chenaihuatc

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有，胶不要太厚了，电压不能太高，胶发热也会导致这种状况。
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9楼2014-11-18 20:11:52
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wxk19960113

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

marker条带都没跑好，可能是胶浓度问题，建议用1％或1.2％，不行多做几个浓度的看看。

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10楼2014-11-19 01:17:22
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