24小时热门版块排行榜    

查看: 1813  |  回复: 34

zhang3shan

金虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-03 22:53:16
引物梯度,循环数梯度,Mg离子浓度梯度,模板量体度,酶量梯度方面试试
star
21楼2014-11-03 22:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihe99

银虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-03 23:00:05
我的一个基因扩全长,引物不好,一直扩不出来,有发夹结构,温度梯度,模板量,touch down都试了,没有目的条带,只有引物二聚体,明天按你的跑一下,试试...

我感觉两步法还是要引物TM值高些才能有效,
你的模版检测过没,有没有问题?
22楼2014-11-04 11:49:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小花猫阿

新虫 (小有名气)

你可以在前几个退火循环里调整一个比较合适的较低的退火温度先进行特异性扩增,减少非特异性扩增,然后再升高退火温度进行接下来的退火循环,看看如何。
23楼2014-11-04 12:21:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小花猫阿

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 惊叹号 at 2014-10-31 22:02:45
我用梯度PCR44℃、46℃、48℃、50℃、52℃,包括58℃、60℃我都试过了,而且有一个问题就是,温度越高,感觉引物二聚体越明显。...

对呀,所以你可以按我说的,找个较低的退火温度循环几次,增加特异性数目,然后再提高退火温度就可以了呀
24楼2014-11-04 12:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小花猫阿

新虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by 小花猫阿 at 2014-11-04 12:23:01
对呀,所以你可以按我说的,找个较低的退火温度循环几次,增加特异性数目,然后再提高退火温度就可以了呀...

温度越高,非特异性越多,所以一定要在低的退火温度循环时进行特异性富集,再升高退火温度进行循环

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

25楼2014-11-04 12:26:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by hihe99 at 2014-11-03 13:14:39
温度越高引物二聚体越多可能是因为温度高就有多的引物没有结合到模版上去反应,最后形成了二聚体。不知道你的引物长度多少,是不是5’端加了酶切位点什么的,说的引物的信息太少,没法判断,要不试试降落pcr吧

谢谢,重新换了引物,现在已经P出来了。
26楼2014-11-05 21:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-11-03 21:18:30
有的,我有时会用这个体系扩片段。...

引物的问题,现在已经P出来了。
27楼2014-11-05 21:46:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
20楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-03 22:00:05
我的一个基因扩全长,引物不好,一直扩不出来,有发夹结构,温度梯度,模板量,touch down都试了,没有目的条带,只有引物二聚体,明天按你的跑一下,试试...

再换引物试试。
28楼2014-11-05 21:47:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
25楼: Originally posted by 小花猫阿 at 2014-11-04 12:26:36
温度越高,非特异性越多,所以一定要在低的退火温度循环时进行特异性富集,再升高退火温度进行循环...

谢谢
29楼2014-11-05 21:48:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
22楼: Originally posted by hihe99 at 2014-11-04 11:49:30
我感觉两步法还是要引物TM值高些才能有效,
你的模版检测过没,有没有问题?...

模板没有问题,同时试了两个基因,另一个做出来了,引物tm不高啊50左右,怎么办?还有什么意见吗?
踏实
30楼2014-11-05 22:20:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 惊叹号 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 08食品或轻工求调剂,本科发表3篇sci一区top论文,一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵, 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
请填处理意见