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古木宁天

铜虫 (初入文坛)
粗暴一点，直接两步法，试一下，循环体系：95℃，5min;        95℃,30s;          65℃：1min30s。
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懒
11楼2014-11-01 16:42:55
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
现在p出来了吗？我有一个基因也是这样的
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踏实
12楼2014-11-01 17:49:50
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惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-01 17:49:50
现在p出来了吗？我有一个基因也是这样的

还是引物的问题。
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13楼2014-11-02 18:22:24
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 刘芬玲 at 2014-11-01 11:34:10
引物Tm值太低了吧，降低退火温度，还有buffer 和镁离子分开的话，调节一下镁离子浓度，我们以前的实验就是受镁离子农奴度影响的，其他的我也暂时没想到

不分开的话怎么调节
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踏实
14楼2014-11-03 10:43:50
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-11-01 16:42:55
粗暴一点，直接两步法，试一下，循环体系：95℃，5min;        95℃,30s;          65℃：1min30s。

有成功的例子吗？
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踏实
15楼2014-11-03 10:44:16
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hihe99

银虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-03 22:52:27
温度越高引物二聚体越多可能是因为温度高就有多的引物没有结合到模版上去反应，最后形成了二聚体。不知道你的引物长度多少，是不是5’端加了酶切位点什么的，说的引物的信息太少，没法判断，要不试试降落pcr吧
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惊叹号
16楼2014-11-03 13:14:39
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_深海渔_

金虫 (小有名气)
做一下梯度分析吧
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17楼2014-11-03 16:54:49
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刘芬玲

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-03 10:43:50
不分开的话怎么调节...

没有分开就按buffer的量加入就好了，一般问题不大
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18楼2014-11-03 17:20:44
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古木宁天

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-03 10:44:16
有成功的例子吗？...

有的，我有时会用这个体系扩片段。
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惊叹号
懒
19楼2014-11-03 21:18:30
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-11-03 21:18:30
有的，我有时会用这个体系扩片段。...

我的一个基因扩全长，引物不好，一直扩不出来，有发夹结构，温度梯度，模板量，touch down都试了，没有目的条带，只有引物二聚体，明天按你的跑一下，试试
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惊叹号
踏实
20楼2014-11-03 22:00:05
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