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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白纯化有两条杂带一直去不掉……
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ylz2433

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化有两条杂带一直去不掉…… 已有4人参与

我的蛋白是His标签，大约93kDa，在纯化的时候在目的蛋白下面一直有两条带去不掉，试了很多条件，像加PMSF、Tween-20、不同浓度NaCl、不同缓冲液、不同pH过Ni柱、过完Ni柱后过Q柱、过完Q柱后过Ni柱，都没什么效果。希望大神赐教啊。最上面的带是我的目的蛋白

蛋白纯化有两条杂带一直去不掉……
1.jpg
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努力，加油！
1楼 2014-10-24 17:10:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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8楼: Originally posted by myheat at 2014-10-27 10:57:04
不知道是什么蛋白 ，native一条带的话应该是复合体。或者是分子伴侣。
...

不能因为native是一条带就推测是复合体或者是分子伴侣
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12楼2014-11-02 21:33:20
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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2楼: Originally posted by lpzl at 2014-10-24 17:24:15
我的也有。。。可能是蛋白讲解吧？楼主纯化后下步实验是啥？若要求不高的话，可以继续往下做

一个93KD的蛋白质降解成三个50-93KD的蛋白质，而这4个蛋白质在非变性胶电泳中呈现1条带，这个概率近于无。
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13楼2014-11-02 21:35:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

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6楼: Originally posted by myheat at 2014-10-25 18:11:24
那两条咋带肯与ni柱非特异结合，伴随着洗脱一起被纯化。reload ni 就可以去掉。或者得用高分辨率的离子交换如source15q 或monoq分离
...

Q FF不能分开的蛋白质，换用SOURCE或MONO只能量变而不能质变，而且一个实验室有Q FF不一定就有SOURCE或MONO，毕竟是三倍价格。建议先试一下疏水层析，HITRAP或者HIPREP都行，价格不用太高的，但最好用强吸附的配基。实在不行再试用阳离子。
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14楼2014-11-02 21:41:18
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