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ylz2433

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化有两条杂带一直去不掉…… 已有4人参与

我的蛋白是His标签,大约93kDa,在纯化的时候在目的蛋白下面一直有两条带去不掉,试了很多条件,像加PMSF、Tween-20、不同浓度NaCl、不同缓冲液、不同pH过Ni柱、过完Ni柱后过Q柱、过完Q柱后过Ni柱,都没什么效果。希望大神赐教啊。最上面的带是我的目的蛋白

蛋白纯化有两条杂带一直去不掉……
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

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8楼: Originally posted by myheat at 2014-10-27 10:57:04
不知道是什么蛋白 ,native一条带的话应该是复合体。或者是分子伴侣。
...

不能因为native是一条带就推测是复合体或者是分子伴侣
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
12楼2014-11-02 21:33:20
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

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2楼: Originally posted by lpzl at 2014-10-24 17:24:15
我的也有。。。可能是蛋白讲解吧?楼主纯化后下步实验是啥?若要求不高的话,可以继续往下做

一个93KD的蛋白质降解成三个50-93KD的蛋白质,而这4个蛋白质在非变性胶电泳中呈现1条带,这个概率近于无。
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13楼2014-11-02 21:35:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

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6楼: Originally posted by myheat at 2014-10-25 18:11:24
那两条咋带肯与ni柱非特异结合,伴随着洗脱一起被纯化。reload ni 就可以去掉。或者得用高分辨率的离子交换如source15q 或monoq分离
...

Q FF不能分开的蛋白质,换用SOURCE或MONO只能量变而不能质变,而且一个实验室有Q FF不一定就有SOURCE或MONO,毕竟是三倍价格。建议先试一下疏水层析,HITRAP或者HIPREP都行,价格不用太高的,但最好用强吸附的配基。实在不行再试用阳离子。
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14楼2014-11-02 21:41:18
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