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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒构建问题
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zrj123456

新虫 (小有名气)
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29楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-10-27 18:52:03
单酶切之后直接连接不会自连吗...

会的，应对办法是去磷酸化，但是其他酶切位点不是很合适
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31楼2014-10-29 15:42:15
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zrj123456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
30楼: Originally posted by 393658000 at 2014-10-28 10:58:02
你找一本NEB的书就可以知道了，3‘末端突出比5’末端突出会难连很多；至于你说的目的片段8KB，载体5KB，你不妨反过来用，8KB的当做载体，5KB 当做片段，然后去算下比例，按比例连接吧，4度过夜连；最后感受态的问题 ...

谢谢，我不做胶回收做了一批，正在验证，如果没结果，就用层主的办法，感受态我试验了下，用我的目的空载体同样操作，长了一满板，不知道符合要求吗
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32楼2014-10-29 15:45:01
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zrj123456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
32楼: Originally posted by zrj123456 at 2014-10-29 15:45:01
谢谢，我不做胶回收做了一批，正在验证，如果没结果，就用层主的办法，感受态我试验了下，用我的目的空载体同样操作，长了一满板，不知道符合要求吗...

大神们，我筛出来了阳性克隆，酶切后载体，片段大小都符合，需要再验证连接方向吗？在线等啊
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33楼2014-10-30 17:54:15
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