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zrj123456

新虫 (小有名气)

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29楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-10-27 18:52:03
单酶切之后直接连接不会自连吗...

会的,应对办法是去磷酸化,但是其他酶切位点不是很合适
31楼2014-10-29 15:42:15
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zrj123456

新虫 (小有名气)

引用回帖:
30楼: Originally posted by 393658000 at 2014-10-28 10:58:02
你找一本NEB的书就可以知道了,3‘末端突出比5’末端突出会难连很多;至于你说的目的片段8KB,载体5KB,你不妨反过来用,8KB的当做载体,5KB 当做片段,然后去算下比例,按比例连接吧,4度过夜连;最后感受态的问题 ...

谢谢,我不做胶回收做了一批,正在验证,如果没结果,就用层主的办法,感受态我试验了下,用我的目的空载体同样操作,长了一满板,不知道符合要求吗
32楼2014-10-29 15:45:01
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zrj123456

新虫 (小有名气)

引用回帖:
32楼: Originally posted by zrj123456 at 2014-10-29 15:45:01
谢谢,我不做胶回收做了一批,正在验证,如果没结果,就用层主的办法,感受态我试验了下,用我的目的空载体同样操作,长了一满板,不知道符合要求吗...

大神们,我筛出来了阳性克隆,酶切后载体,片段大小都符合,需要再验证连接方向吗?在线等啊
33楼2014-10-30 17:54:15
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