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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zrj123456

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒构建问题 已有8人参与

单酶切质粒后,出现两个片段,不做胶回收,清洁后直接与另一个酶切后载体连接,会出现什么现象?胶回收率实在是低啊?想这样竞争结合,会出现我要的结果吗
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zrj123456

新虫 (小有名气)

引用回帖:
30楼: Originally posted by 393658000 at 2014-10-28 10:58:02
你找一本NEB的书就可以知道了,3‘末端突出比5’末端突出会难连很多;至于你说的目的片段8KB,载体5KB,你不妨反过来用,8KB的当做载体,5KB 当做片段,然后去算下比例,按比例连接吧,4度过夜连;最后感受态的问题 ...

谢谢,我不做胶回收做了一批,正在验证,如果没结果,就用层主的办法,感受态我试验了下,用我的目的空载体同样操作,长了一满板,不知道符合要求吗
32楼2014-10-29 15:45:01
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zergbloody

铁虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 20:41:00
效率低不怕 其实很少量的载体也可以连接的 多了反而会抑制连接反应 关键是你连接酶要够好

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-23 22:50:20
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么会单酶切?那样的话怎么连接载体?
3楼2014-10-24 08:16:06
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)

为什么单酶切,怎么连接载体呢
4楼2014-10-24 08:16:38
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