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zrj123456

新虫 (小有名气)

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[交流] 质粒构建问题已有8人参与

单酶切质粒后，出现两个片段，不做胶回收，清洁后直接与另一个酶切后载体连接，会出现什么现象？胶回收率实在是低啊？想这样竞争结合，会出现我要的结果吗

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1楼 2014-10-23 17:05:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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金虫 (小有名气)

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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-30 19:15:58

引用回帖:

21楼: Originally posted by zrj123456 at 2014-10-27 10:58:26
谢谢您，我不太明白您说的3末端比5末端难连是什么情况？我做了几次胶回收用20微升去离子水回收，浓度都只是30ng/μl左右，目的片段是8kb，载体5kb，连了几次，都是连假阳性都没有，不知道什么情况，感受态实验室都 ...

你找一本NEB的书就可以知道了，3‘末端突出比5’末端突出会难连很多；至于你说的目的片段8KB，载体5KB，你不妨反过来用，8KB的当做载体，5KB 当做片段，然后去算下比例，按比例连接吧，4度过夜连；最后感受态的问题，你这质粒加起来13K了，不知道你是何种感受态，找个效率高点的转化吧。