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zrj123456

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒构建问题 已有8人参与

单酶切质粒后,出现两个片段,不做胶回收,清洁后直接与另一个酶切后载体连接,会出现什么现象?胶回收率实在是低啊?想这样竞争结合,会出现我要的结果吗
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zrj123456

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 393658000 at 2014-10-27 10:11:14
没记错PacI酶切以后的3‘突出末端,连接本来就会比5’突出端难;另外您这是载体,片段都是单酶切,结果会出现很多种情况,比如,载体自连;片段叠加后再跟载体连;同时您的片段也是从一个质粒上单酶切下来的,也有再 ...

谢谢您,我不太明白您说的3末端比5末端难连是什么情况?我做了几次胶回收用20微升去离子水回收,浓度都只是30ng/μl左右,目的片段是8kb,载体5kb,连了几次,都是连假阳性都没有,不知道什么情况,感受态实验室都用,酶也是公用,
21楼2014-10-27 10:58:26
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zergbloody

铁虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 20:41:00
效率低不怕 其实很少量的载体也可以连接的 多了反而会抑制连接反应 关键是你连接酶要够好

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-23 22:50:20
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么会单酶切?那样的话怎么连接载体?
3楼2014-10-24 08:16:06
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)

为什么单酶切,怎么连接载体呢
4楼2014-10-24 08:16:38
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