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zrj123456

新虫 (小有名气)

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[交流] 质粒构建问题已有8人参与

单酶切质粒后，出现两个片段，不做胶回收，清洁后直接与另一个酶切后载体连接，会出现什么现象？胶回收率实在是低啊？想这样竞争结合，会出现我要的结果吗

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1楼 2014-10-23 17:05:55

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金虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-30 19:15:11

没记错PacI酶切以后的3‘突出末端，连接本来就会比5’突出端难；另外您这是载体，片段都是单酶切，结果会出现很多种情况，比如，载体自连；片段叠加后再跟载体连；同时您的片段也是从一个质粒上单酶切下来的，也有再连回去的可能；不知道为何你说回收效率很低，是切片段的质粒大小跟片段大小差异太大还是说什么情况完全不清楚，所以没法给你更多的建议；您不妨把情况说的更清楚些！