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wccbb

木虫 (著名写手)

[求助] 内标法加入量的问题 谢谢 已有1人参与

各位大侠:
      做组织分布实验,采用内标法计算。空白预实验得到10ul(50ug/ml)【这个浓度差不多是标准曲线上面100%的点浓度】的药物与10ul(10ug/ml)内标经过样品处理后进样的峰面积 二者相接近。我想请教一下,我认为内标的加入量应该本着A药/A内=1,即药物和内标的响应值相接近,但是有的文献介绍是二者浓度相接近为原则,不知道哪个正确?还有 药物与内标的峰面积比值,有没有必须小于1的说法,还是大于1也可以?我预实验的绝对回收率大概是60%多,是否可以,我看论文中都写80%多,不知道怎么做的?最后一个问题:含有内标的方法中,绝对回收率和相对回收率怎么计算?非常感谢!
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wccbb: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-10-23 08:35:22
内标的浓度没有严格的要求。
做生物样品分析的时候,一般习惯内标峰面积控制在你标曲ULOQ化合物峰面积的50%左右,只要质谱的响应比较稳定即可。
样品前处理后,一般绝对回收率要求在80%以上,认为方法较好。
但是只要控制你低中高浓度的回收率CV不是很大,你的方法也是可行的。
绝对回收率是用峰面积比值来算,对照组没有提取过程,其他保持一致。
相对回收率是用ratio计算。
坚持
2楼2014-10-22 20:32:29
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wccbb

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rosegarden at 2014-10-22 20:32:29
内标的浓度没有严格的要求。
做生物样品分析的时候,一般习惯内标峰面积控制在你标曲ULOQ化合物峰面积的50%左右,只要质谱的响应比较稳定即可。
样品前处理后,一般绝对回收率要求在80%以上,认为方法较好。
但是 ...

非常感谢,请问“相对回收率是用ratio计算”否都具体说一下,给举个简单的例子 谢谢啦
3楼2014-10-23 08:36:52
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rosegarden

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wccbb at 2014-10-23 08:36:52
非常感谢,请问“相对回收率是用ratio计算”否都具体说一下,给举个简单的例子 谢谢啦...

做生物样本分析的时候通常采用内标法。
在进行定量分析的时候,是采用ratio,也就是f值:化合物和内标的峰面积比值。
相对回收率的计算就是用样品组和对照组ratio的比值
坚持
4楼2014-10-23 16:09:03
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