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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 内标法加入量的问题 谢谢
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wccbb

木虫 (著名写手)

[求助] 内标法加入量的问题 谢谢 已有1人参与

各位大侠：
      做组织分布实验，采用内标法计算。空白预实验得到10ul（50ug/ml）【这个浓度差不多是标准曲线上面100%的点浓度】的药物与10ul（10ug/ml）内标经过样品处理后进样的峰面积 二者相接近。我想请教一下，我认为内标的加入量应该本着A药/A内=1，即药物和内标的响应值相接近，但是有的文献介绍是二者浓度相接近为原则，不知道哪个正确？还有 药物与内标的峰面积比值，有没有必须小于1的说法，还是大于1也可以?我预实验的绝对回收率大概是60%多，是否可以，我看论文中都写80%多，不知道怎么做的？最后一个问题：含有内标的方法中，绝对回收率和相对回收率怎么计算？非常感谢！
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1楼 2014-10-22 15:28:12
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wccbb: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-10-23 08:35:22
内标的浓度没有严格的要求。
做生物样品分析的时候，一般习惯内标峰面积控制在你标曲ULOQ化合物峰面积的50%左右，只要质谱的响应比较稳定即可。
样品前处理后，一般绝对回收率要求在80%以上，认为方法较好。
但是只要控制你低中高浓度的回收率CV不是很大，你的方法也是可行的。
绝对回收率是用峰面积比值来算，对照组没有提取过程，其他保持一致。
相对回收率是用ratio计算。
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坚持
2楼2014-10-22 20:32:29
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wccbb

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rosegarden at 2014-10-22 20:32:29
内标的浓度没有严格的要求。
做生物样品分析的时候，一般习惯内标峰面积控制在你标曲ULOQ化合物峰面积的50%左右，只要质谱的响应比较稳定即可。
样品前处理后，一般绝对回收率要求在80%以上，认为方法较好。
但是 ...

非常感谢，请问“相对回收率是用ratio计算”否都具体说一下，给举个简单的例子 谢谢啦
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3楼2014-10-23 08:36:52
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rosegarden

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wccbb at 2014-10-23 08:36:52
非常感谢，请问“相对回收率是用ratio计算”否都具体说一下，给举个简单的例子 谢谢啦...

做生物样本分析的时候通常采用内标法。
在进行定量分析的时候，是采用ratio，也就是f值：化合物和内标的峰面积比值。
相对回收率的计算就是用样品组和对照组ratio的比值
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坚持
4楼2014-10-23 16:09:03
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