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yong1302

新虫 (初入文坛)

[交流] 目的蛋白202KDA,表达量不太高且在沉淀中,是不是很难纯化? 已有4人参与

试表达在37℃、28℃诱导不表达,18℃表达。分别用了变复性过柱法及变复性透析法纯化,结果都未发现目的蛋白。有哪位高人也做过相类似大小的包涵体蛋白纯化的?可以指导指导
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cnzpli

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近同样在做原核表达 还没纯化 但愿我不要有这个问题

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-21 23:07:30
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白太大了,确实不好表达
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-10-23 09:20:57
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yangyufeng88

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
包涵体还不好纯化?是不是你检测的问题,这么大的蛋白用多少浓度的胶跑的呢?
要适应生活,才能改变生活!
4楼2014-10-25 00:10:47
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yangyufeng88

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
变性后找个100kd的超滤管过几次,都可以挺纯了吧?
要适应生活,才能改变生活!
5楼2014-10-25 00:14:37
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yong1302

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yangyufeng88 at 2014-10-25 00:10:47
包涵体还不好纯化?是不是你检测的问题,这么大的蛋白用多少浓度的胶跑的呢?

8%的蛋白胶
6楼2014-11-14 10:06:22
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raycupid

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子量越大,复性成功率越低,无解。如果实在不能可溶,那就试试复性呗,但要有心理准备。

发自小木虫Android客户端
7楼2017-02-26 11:30:43
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