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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的蛋白202KDA，表达量不太高且在沉淀中，是不是很难纯化？
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yong1302

新虫 (初入文坛)

[交流] 目的蛋白202KDA，表达量不太高且在沉淀中，是不是很难纯化？ 已有4人参与

试表达在37℃、28℃诱导不表达，18℃表达。分别用了变复性过柱法及变复性透析法纯化，结果都未发现目的蛋白。有哪位高人也做过相类似大小的包涵体蛋白纯化的？可以指导指导
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1楼 2014-10-21 20:42:25
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cnzpli

金虫 (正式写手)
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最近同样在做原核表达 还没纯化 但愿我不要有这个问题

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2楼2014-10-21 23:07:30
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
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蛋白太大了，确实不好表达
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-10-23 09:20:57
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yangyufeng88

木虫 (正式写手)
★
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包涵体还不好纯化？是不是你检测的问题，这么大的蛋白用多少浓度的胶跑的呢？
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要适应生活，才能改变生活！
4楼2014-10-25 00:10:47
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yangyufeng88

木虫 (正式写手)
★
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变性后找个100kd的超滤管过几次，都可以挺纯了吧？
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要适应生活，才能改变生活！
5楼2014-10-25 00:14:37
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yong1302

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yangyufeng88 at 2014-10-25 00:10:47
包涵体还不好纯化？是不是你检测的问题，这么大的蛋白用多少浓度的胶跑的呢？

8%的蛋白胶
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6楼2014-11-14 10:06:22
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raycupid

金虫 (初入文坛)
★
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分子量越大，复性成功率越低，无解。如果实在不能可溶，那就试试复性呗，但要有心理准备。

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7楼2017-02-26 11:30:43
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