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目的蛋白202KDA,表达量不太高且在沉淀中,是不是很难纯化?
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yong1302
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[交流]
目的蛋白202KDA,表达量不太高且在沉淀中,是不是很难纯化?
已有4人参与
试表达在37℃、28℃诱导不表达,18℃表达。分别用了变复性过柱法及变复性透析法纯化,结果都未发现目的蛋白。有哪位高人也做过相类似大小的包涵体蛋白纯化的?可以指导指导
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1楼
2014-10-21 20:42:25
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cnzpli
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最近同样在做原核表达 还没纯化 但愿我不要有这个问题
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2楼
2014-10-21 23:07:30
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fuyuandj86
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蛋白太大了,确实不好表达
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼
2014-10-23 09:20:57
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yangyufeng88
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包涵体还不好纯化?是不是你检测的问题,这么大的蛋白用多少浓度的胶跑的呢?
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要适应生活,才能改变生活!
4楼
2014-10-25 00:10:47
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yangyufeng88
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变性后找个100kd的超滤管过几次,都可以挺纯了吧?
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要适应生活,才能改变生活!
5楼
2014-10-25 00:14:37
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yong1302
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4楼
:
Originally posted by
yangyufeng88
at 2014-10-25 00:10:47
包涵体还不好纯化?是不是你检测的问题,这么大的蛋白用多少浓度的胶跑的呢?
8%的蛋白胶
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6楼
2014-11-14 10:06:22
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raycupid
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分子量越大,复性成功率越低,无解。如果实在不能可溶,那就试试复性呗,但要有心理准备。
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7楼
2017-02-26 11:30:43
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