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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR 引物3‘端加18个非匹配碱基为什么还能扩出来
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青葱年华

新虫 (小有名气)

[求助] PCR 引物3‘端加18个非匹配碱基为什么还能扩出来 已有1人参与

我们设计了针对好几个基因的PCR引物，目的是想在引物的3’端加几个不匹配的碱基让其无法扩增，为什么我每次都能扩出来呢？这和平时的PCR理论相悖啊，不是引物或模板污染的问题，谁能帮忙解释一下这个现象啊？谢谢。
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1楼 2014-10-15 19:44:20
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syn1985

木虫 (正式写手)
为什么要无法扩增引物，既然不想扩片段为何还要设计引物
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2楼2014-10-15 19:49:16
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青葱年华

新虫 (小有名气)
原理是我上面描述的那样，我是做其他的实验，要保证它扩不出来才行。
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3楼2014-10-15 19:59:05
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青葱年华

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by syn1985 at 2014-10-15 19:49:16
为什么要无法扩增引物，既然不想扩片段为何还要设计引物

原理是我上面描述的那样，我是做其他的实验，要保证它扩不出来才行。
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4楼2014-10-15 20:00:47
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青葱年华

新虫 (小有名气)
有高人知道其中的原因吗？
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5楼2014-10-16 11:09:33
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青葱年华

新虫 (小有名气)
金币无人来领吗？求高手出现啊？
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6楼2014-10-18 10:46:52
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物长了容易非特异性扩增。
加几个碱基就好了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2014-10-18 12:21:18
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青葱年华

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lxj341401 at 2014-10-18 12:21:18
引物长了容易非特异性扩增。
加几个碱基就好了。

能说的详细点吗？我这个模板是PCR切胶回收的，非特异性的概率很低啊。
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8楼2014-10-19 14:24:47
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