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justsmiling

银虫 (小有名气)

[求助] DNA复制过程的相关问题 已有2人参与

请问在DNA复制过程中除了模板,引物,dNTP,Mg2+外,还需要加ATP提供能量吗?在复制过程中加样的顺序有没有要求呢,我用的是Klenow Fragment聚合酶。
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-13 09:06:03
不需要ATP,一般来说,最后加酶
低调务实!
2楼2014-10-13 08:48:16
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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA复制(实质上是脱氧核苷酸的聚合反应)所需要的能量就是由dNTP混合物提供的,它同时充当了聚合单体和能量来源两个角色。

DNA复制中,每引入一个脱氧核苷酸,就有一个dNTP(脱氧三磷酸核苷酸)分子作为反应物进入,然后发生水解,水解释放的能量驱使dNMP(脱氧单磷酸核苷酸)部分作为DNA链的环节与已有链连接,同时产生一个焦磷酸分子脱离聚合体系。
3楼2014-10-13 11:25:31
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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by greeneese at 2014-10-13 11:25:31
DNA复制(实质上是脱氧核苷酸的聚合反应)所需要的能量就是由dNTP混合物提供的,它同时充当了聚合单体和能量来源两个角色。

DNA复制中,每引入一个脱氧核苷酸,就有一个dNTP(脱氧三磷酸核苷酸)分子作为反应物进 ...

第二段表述不太准确可能会造成误解,应该是 “每当需要引入一个脱氧核苷酸的时候,就会有一个dNTP分子作为反应物进入”。
4楼2014-10-13 11:27:19
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justsmiling

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2014-10-13 08:48:16
不需要ATP,一般来说,最后加酶

请问模板,引物,还有dNTP的加入顺序有要求吗?比如要先让模板和引物反应一段时间再加入dNTP之类的?
5楼2014-10-13 13:25:18
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by justsmiling at 2014-10-13 13:25:18
请问模板,引物,还有dNTP的加入顺序有要求吗?比如要先让模板和引物反应一段时间再加入dNTP之类的?...

理论上模板与引物先结合一会,对扩增有利,你自己可以研究一下有没有影响
低调务实!
6楼2014-10-13 14:49:38
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