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蔻思妮

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于测定萝卜中的多酚氧化酶活性遇到的问题,急啊。。。 已有3人参与

我测定的是白萝卜中多酚氧化酶的活性,之前测得过程中都很正常,吸光度值逐渐上升,但最近测定时吸光度值几乎一条直线都为零,溶液颜色也没有什么变化,好几天了找不出原因,求大神指导!
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶失活了?底物已经氧化了?基本就是这两个问题,你的底物用的是什么,酪氨酸吗?
获取网盘密码请点击:http://emuch.net/bbs/box.php(复制之后,黏贴到浏览器地址栏)
2楼2014-10-11 17:28:01
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蔻思妮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-10-11 17:28:01
酶失活了?底物已经氧化了?基本就是这两个问题,你的底物用的是什么,酪氨酸吗?

底物是邻苯二酚,新配的,应该不会氧化吧,样品是一厘米厚的萝卜片经过30℃干燥1h后,加入提取缓冲液打浆,冷冻离心,取上清液作为酶液然后测定的,你也测过ppo吗?
3楼2014-10-11 20:35:06
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蔻思妮 at 2014-10-11 20:35:06
底物是邻苯二酚,新配的,应该不会氧化吧,样品是一厘米厚的萝卜片经过30℃干燥1h后,加入提取缓冲液打浆,冷冻离心,取上清液作为酶液然后测定的,你也测过ppo吗?...

测过,我测过的是酪氨酸酶PPO2,你的酶液浓度怎么样,你之前都是用这种方法?
获取网盘密码请点击:http://emuch.net/bbs/box.php(复制之后,黏贴到浏览器地址栏)
4楼2014-10-11 20:51:05
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99503102

版主 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
答非所问: 应助指数-1, 非有效应助 2014-10-13 12:17:02
你的胡萝卜这几天贮藏在哪?估计里面的酶已经失活。
微信公众号:食安小屋
5楼2014-10-11 21:26:46
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蔻思妮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蔻思妮 at 2014-10-11 20:35:06
底物是邻苯二酚,新配的,应该不会氧化吧,样品是一厘米厚的萝卜片经过30℃干燥1h后,加入提取缓冲液打浆,冷冻离心,取上清液作为酶液然后测定的,你也测过ppo吗?...

我后来又测来着,发现新配的邻苯二酚溶液测定,吸光度值就一直几乎为零,但是放几天后再测,吸光度值就逐渐增加了,就一切正常了。前天有用现配的测得还是这样,用旧溶液就可以,很邪门儿,还没有分析出具体原因,我觉得问题就出在邻苯二酚这个底物上,同学,非常感谢你!
6楼2014-10-21 15:27:07
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假装

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 蔻思妮 at 2014-10-21 15:27:07
我后来又测来着,发现新配的邻苯二酚溶液测定,吸光度值就一直几乎为零,但是放几天后再测,吸光度值就逐渐增加了,就一切正常了。前天有用现配的测得还是这样,用旧溶液就可以,很邪门儿,还没有分析出具体原因, ...

我也是这样,我看了有说过,邻苯二酚要提前1-2天配,不要用新配的。
7楼2014-12-19 10:20:50
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xiaoxiaomin1980

木虫 (正式写手)

那我想请问一下,你有没有加什么试剂终止反应呀?我最近也在测。
8楼2015-08-26 16:42:33
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苏苏_22

新虫 (初入文坛)

我也想知道你是怎么测的呀,我现在在测抑制剂对酶活的影响,好像设计的测的方法不好,空白管不知要加什么了?求帮助!

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9楼2016-06-07 13:57:19
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苏苏_22

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-10-11 20:51:05
测过,我测过的是酪氨酸酶PPO2,你的酶液浓度怎么样,你之前都是用这种方法?...

你好,我想问下你是怎么测的多酚氧化酶的酶活,我在做抑制剂对酶活的影响,之前用的调零管是PBS和邻苯二酚的混合溶液,但是邻苯二酚自氧化,是不是不能用来调零,因为我是每30秒一测,调零管好像就会有问题,现在都不知怎么测了,求指教,谢谢

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10楼2016-06-07 14:01:45
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