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曾经走过金虫 (初入文坛)
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做酵母双杂在二缺培养液中酵母摇成球状，为什么呀？ 已有3人参与
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| 本人现在在做酵母双杂，将AD和BK的载体导入后，在二缺板上长了，然后想在二缺液中摇起来点四缺板，但是酵母聚集成了球状，不是分散的，有哪位见过这种情况？？急求 |
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建议参考德国的酵母双杂交系统 特点和优点： 1. 可以筛选不同蛋白-蛋白之间相互作用的强度； 2. 利用铜诱导的CUP1/ACE1系统能更有效的检测体内蛋白相互作用； 3. 利用铜抗性这种严格的筛选，会出现很少的假阳性； 4. 利用GFP这种绿色荧光蛋白的报告基因，筛选阳性菌株可以节省大量的时间； 5. 筛选阳性菌株不需要外部酶底物，如X-Gal； 6. 适合高通量的筛选分析。 产品介绍： 酵母双杂交系统是一种用于筛选体内蛋白-蛋白之间相互作用的方法，它依赖于DNA结合结构域和DNA激活结构域的分离，并将这两个结构域基因分别与两个蛋白基因融合在一起，如果两种蛋白能够相互作用，就会使这两个结构域重组成一个有活性的转录因子复合物，这样，就会使报告基因得以表达。 MoBiTec的ACE1双杂交系统是一个强大的工具，它可以用于新基因的发现和功能分析，而且可以有效的鉴别体内蛋白-蛋白的作用。它将铜诱导的转录因子ACE1和铜抗性CUP1基因与作为报告基因绿色荧光蛋白GFP基因结合起来。两种相互作用的蛋白分别与ACE1的DNA结合结构域和DNA激活结构域相融合，从而使我们可以通过下面的方法筛选：1.在含铜的培养基上生长的细胞；2.依赖铜表达的强荧光GFP可以通过紫外光检测到。 因此，这种新技术，可以很有效的通过一步法筛选可能的阳性表达，即在含有铜的培养基上生长并发出绿色荧光的菌株。它是一种快速、高灵敏度和更值得信赖的检测方法。不断改变铜浓度还可以筛选出不同蛋白之间相互作用的强度。 本网链接 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7590557&view=mp |
5楼2014-10-13 08:23:25
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