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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chicktrick

铁虫 (初入文坛)

[求助] 感受态细胞相关问题 各种姿势求指点 已有4人参与

我最近刚开始做感受态细胞的转化，用的胶回收dna 与takara的pmd18-t盒子进行转化，感受态细胞是购买的成品。dna与载体链接之后加入感受态细胞，热激处理，然后加入含有amp的LB培养基中摇菌培养一小时 之后涂板。 涂板结果是有很多零散单菌落，但是验证的时候全部为假阳性。后来老师指出在热激处理之后摇菌不应该使用加入amp的培养基。 现在我的疑问就是先前操作得到的单菌落是什么，如果是污染的话 为何菌落可以分辨出明显的涂板痕迹（可能是没涂开的原因可以看见许多单菌落连成一条线） 如果不是杂菌污染的话为何感受态细胞可以在amp的平板上生长。
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1楼 2014-09-30 09:46:43
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-30 12:33:05
我觉得单菌落就是污染。
感受态细胞要在amp的平板上生长首先需要载体转入后表达氨苄抗性，无amp摇菌1h就是为了给菌时间用来表达抗性和增加菌群数量。
不晓得你们实验室对克隆平板是咋个处理的，培养抗氨苄细菌的平板到处乱扔很容易造成室内空气污染，涂板子操作不小心很容易长杂菌的。
闲话一句，当年我在克隆实验室里喝了杯水，结果回去狂拉肚子，吃头孢才压下去。你说这个抗氨苄的菌污染厉不厉害？
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3楼2014-09-30 10:50:01
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-30 12:33:01
你老师是对的，这个问题其实没必要纠结的，重新做就是了。
一般这种情况看到板上有菌痕，也就是你说的涂板痕迹，这是死菌。
涂板是需要用抗性板的，有假阳性菌落，菌落你需要区分好，不要和菌痕混淆，
可能是抗生素失活，培养时间久了
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操蛋的XX
2楼2014-09-30 10:45:22
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cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-30 12:33:10
单菌落可能是T载体自连的，可以把提的质粒以pIJ2925为对照跑一下，如果一样大那就是自连的。个人经验，那种能看见涂板痕迹的一般都是假阳性。
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4楼2014-09-30 11:00:04
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-30 12:33:14
单纯的感受态细胞是不会在AMP 的平板上长的。至于杂菌的来源真的不需要太纠结，重新做一次就好了。
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学习再学习，努力再努力。
5楼2014-09-30 11:02:41
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