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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » DAPI染色出现问题，求帮助
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hao901025

金虫 (初入文坛)

[求助] DAPI染色出现问题，求帮助 已有1人参与

我的DAPI染的是活的未固定的HeLa细胞，之前染得还可以，可以清楚看到核，现在不可以了，附一张图，希望大家可以帮忙找找问题

DAPI染色出现问题，求帮助
DAPI染色.jpg
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1楼 2014-09-25 19:38:13
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定DAPI还好用吗？最近是偶尔一次，还是一直这样呢。
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人生中的悲剧太多了
2楼2014-09-25 22:02:04
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hao901025

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-09-25 22:02:04
确定DAPI还好用吗？最近是偶尔一次，还是一直这样呢。

半月前用还好用，最近就这样个样子了，不确定是不是DAPI的问题
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3楼2014-09-26 08:26:07
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陌路行客

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hao901025 at 2014-09-26 08:26:07
半月前用还好用，最近就这样个样子了，不确定是不是DAPI的问题...

细胞的处理和之前有区别吗，比如通透时间，DAPI孵育时间和洗涤时间，
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人生中的悲剧太多了
4楼2014-09-26 08:50:31
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hao901025

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-09-26 08:50:31
细胞的处理和之前有区别吗，比如通透时间，DAPI孵育时间和洗涤时间，...

没有，所有处理手段都一样，细胞也是同一个，中间没有复苏过其他，一直在传代的同一细胞，昨天加大染料量处理，还是同样的效果
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5楼2014-09-26 11:08:55
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1039089967

铁杆木虫 (正式写手)
很像细胞受伤了，也可能是污染了。
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6楼2014-09-28 18:56:20
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匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
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7楼2016-04-01 15:34:05
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hao901025

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 8711016923306 at 2016-04-01 15:34:05
楼主你的这个问题解决了吗？我的细胞出现的状况跟你的非常像，也不知道是什么原因，求指教！！！

这个问题解决了，因为我的细胞是在加药之前染色的，然后细胞状态好的时候细胞膜完整，并且对DAPI的通透性不高，后来我过夜染色了，效果就很好看了。但是过夜染色可能对细胞周期有影响，而我的实验只要求膜的完整性，具体还得根据你的实验情况而定。
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8楼2016-08-29 15:23:18
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hao901025

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 8711016923306 at 2016-04-01 15:34:05
楼主你的这个问题解决了吗？我的细胞出现的状况跟你的非常像，也不知道是什么原因，求指教！！！

这个问题解决了，因为我的细胞是在加药之前染色的，然后细胞状态好的时候细胞膜完整，并且对DAPI的通透性不高，后来我过夜染色了，效果就很好看了。但是过夜染色可能对细胞周期有影响，而我的实验只要求膜的完整性，具体还得根据你的实验情况而定。
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9楼2016-08-29 15:26:19
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柚子小姐lu

铜虫 (正式写手)
楼主 请问一下 这种染色需要破膜吗 我的实验需要膜完整 如果我把离心收集到的细胞直接加上DAPI染色 滴到片子上就可以直接观察了吗？
还需要注意什么？ 染色的时间要多久呢？ 谢谢分享
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10楼2016-10-06 21:23:45
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