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hao901025

金虫 (初入文坛)

[求助] DAPI染色出现问题,求帮助已有1人参与

我的DAPI染的是活的未固定的HeLa细胞,之前染得还可以,可以清楚看到核,现在不可以了,附一张图,希望大家可以帮忙找找问题

DAPI染色出现问题,求帮助
DAPI染色.jpg
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定DAPI还好用吗?最近是偶尔一次,还是一直这样呢。
人生中的悲剧太多了
2楼2014-09-25 22:02:04
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hao901025

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-09-25 22:02:04
确定DAPI还好用吗?最近是偶尔一次,还是一直这样呢。

半月前用还好用,最近就这样个样子了,不确定是不是DAPI的问题
3楼2014-09-26 08:26:07
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陌路行客

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hao901025 at 2014-09-26 08:26:07
半月前用还好用,最近就这样个样子了,不确定是不是DAPI的问题...

细胞的处理和之前有区别吗,比如通透时间,DAPI孵育时间和洗涤时间,
人生中的悲剧太多了
4楼2014-09-26 08:50:31
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hao901025

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 陌路行客 at 2014-09-26 08:50:31
细胞的处理和之前有区别吗,比如通透时间,DAPI孵育时间和洗涤时间,...

没有,所有处理手段都一样,细胞也是同一个,中间没有复苏过其他,一直在传代的同一细胞,昨天加大染料量处理,还是同样的效果
5楼2014-09-26 11:08:55
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1039089967

铁杆木虫 (正式写手)

很像细胞受伤了,也可能是污染了。
6楼2014-09-28 18:56:20
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匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
7楼2016-04-01 15:34:05
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hao901025

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 8711016923306 at 2016-04-01 15:34:05
楼主你的这个问题解决了吗?我的细胞出现的状况跟你的非常像,也不知道是什么原因,求指教!!!

这个问题解决了,因为我的细胞是在加药之前染色的,然后细胞状态好的时候细胞膜完整,并且对DAPI的通透性不高,后来我过夜染色了,效果就很好看了。但是过夜染色可能对细胞周期有影响,而我的实验只要求膜的完整性,具体还得根据你的实验情况而定。
8楼2016-08-29 15:23:18
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hao901025

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 8711016923306 at 2016-04-01 15:34:05
楼主你的这个问题解决了吗?我的细胞出现的状况跟你的非常像,也不知道是什么原因,求指教!!!

这个问题解决了,因为我的细胞是在加药之前染色的,然后细胞状态好的时候细胞膜完整,并且对DAPI的通透性不高,后来我过夜染色了,效果就很好看了。但是过夜染色可能对细胞周期有影响,而我的实验只要求膜的完整性,具体还得根据你的实验情况而定。
9楼2016-08-29 15:26:19
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柚子小姐lu

铜虫 (正式写手)

楼主 请问一下 这种染色需要破膜吗 我的实验需要膜完整 如果我把离心收集到的细胞直接加上DAPI染色 滴到片子上就可以直接观察了吗?
还需要注意什么? 染色的时间要多久呢? 谢谢分享
10楼2016-10-06 21:23:45
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