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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 弱问DAPI对微生物染色是在哪里染？载玻片，膜上，还是离心管里面？
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)

[求助] 弱问DAPI对微生物染色是在哪里染？载玻片，膜上，还是离心管里面？ 已有1人参与

请问各位大神如果想用DAPI染色观察的话应该在哪里操作？我找了一下只看到步骤，不太清楚是在哪里染色。我的微生物OD值比较低，离心之后很难看见，这种情况是不是应该先过个膜，然后在膜上固定染色？
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1楼 2013-12-30 11:21:11
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lglgl

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
圣迭戈: 金币+40, ★★★很有帮助, 非常感谢 2014-01-02 09:17:35
现在离心管里染色，再过膜
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2楼2013-12-30 22:47:12
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lglgl at 2013-12-30 22:47:12
现在离心管里染色，再过膜

膜有没有要求啊？我看到有的文献说要黑色的膜才好，是这样的吗？
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3楼2013-12-31 09:05:00
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muji9908

铁虫 (小有名气)
是这样的，因为黑色的膜可以减低荧光背景。如果你不介意背景,一般的的polycarbonate membrane都可以用
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4楼2013-12-31 12:45:44
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圣迭戈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by muji9908 at 2013-12-31 12:45:44
是这样的，因为黑色的膜可以减低荧光背景。如果你不介意背景,一般的的polycarbonate membrane都可以用

嗯，太感谢了。那问一下，要是先在离心管里面染色，是直接加DAPI进去吗？之前需不需要清洗一下？还有染色好以后，需不需要清洗一下再过膜？
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5楼2013-12-31 15:32:10
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muji9908

铁虫 (小有名气)
直接加到管里去，如果你的细菌不干净，你可以离心沉淀一下，稀释后再加dapi.然后用真空泵过滤，没有染上的dapi会从膜上漏出去，然后再用1-2倍的水或pbs在真空泵上把膜洗一遍就好了。
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6楼2014-01-03 11:05:24
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