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kiki1289

银虫 (小有名气)

[求助] 放线菌DNA怎么快速提 已有3人参与

以前做放线菌DNA提取都是液体摇瓶七天,很花时间,这次很急,我想能不能直接刮菌丝提啊?各位这样做过吗?大概刮多少呢?
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-10-24 16:06:50
可以吧,好像先用液氮研磨破壁,然后在用SDS 溶菌酶 蛋白酶 RNA酶,酚氯仿抽提等后续常规步骤
只要有梦想,坚持就一定能实现
2楼2014-09-21 10:04:44
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

另外液体培养基可选择TSB等丰富培养基,转速要快一点,1-2天就长好多菌丝体了
只要有梦想,坚持就一定能实现
3楼2014-09-21 10:06:18
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kiki1289

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by flhua at 2014-09-21 10:06:18
另外液体培养基可选择TSB等丰富培养基,转速要快一点,1-2天就长好多菌丝体了

谢谢,去试试
4楼2014-09-24 21:53:56
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lgd19891003

铁虫 (初入文坛)

最快的是用10%或者5%的chelex-100煮10分钟,离心10分钟,上清液里。
不懂就不懂,不能欺人,也不自欺
5楼2014-10-16 19:30:12
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七小艾

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by flhua at 2014-09-21 10:04:44
可以吧,好像先用液氮研磨破壁,然后在用SDS 溶菌酶 蛋白酶 RNA酶,酚氯仿抽提等后续常规步骤

我也在做放线菌,不过我是提蛋白组,液氮研磨破壁效果很差。第一次做液氮研磨,有什么讲究吗?比如大概多少菌体,要研磨多久?我是加液氮研磨,到液氮挥发光了再加再研磨,重复10次。不知道这样操作有没有问题,求指教
6楼2014-10-23 15:37:39
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寻找丢失的ID

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

冻融交替破壁,再溶菌酶过夜,效果很好
7楼2014-12-03 15:34:32
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开小猫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

提DNA的话可以直接刮菌丝提啊,我们以前都是这么提的,可以多刮一些,不过后面用异丙醇沉淀的时候有可能看不到沉淀,把上清倒掉的时候小心点就ok~
8楼2014-12-05 14:13:58
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lgd19891003

铁虫 (初入文坛)

如果用量不大的话,直接刮菌丝提是可以的,黄豆粒大小可行
不懂就不懂,不能欺人,也不自欺
9楼2017-09-05 09:10:53
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