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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 放线菌DNA怎么快速提
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kiki1289

银虫 (小有名气)

[求助] 放线菌DNA怎么快速提 已有3人参与

以前做放线菌DNA提取都是液体摇瓶七天，很花时间，这次很急，我想能不能直接刮菌丝提啊？各位这样做过吗？大概刮多少呢？
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1楼 2014-09-20 14:48:40
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-10-24 16:06:50
可以吧，好像先用液氮研磨破壁，然后在用SDS 溶菌酶 蛋白酶 RNA酶，酚氯仿抽提等后续常规步骤
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只要有梦想，坚持就一定能实现
2楼2014-09-21 10:04:44
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

另外液体培养基可选择TSB等丰富培养基，转速要快一点，1-2天就长好多菌丝体了
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只要有梦想，坚持就一定能实现
3楼2014-09-21 10:06:18
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kiki1289

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by flhua at 2014-09-21 10:06:18
另外液体培养基可选择TSB等丰富培养基，转速要快一点，1-2天就长好多菌丝体了

谢谢，去试试
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4楼2014-09-24 21:53:56
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lgd19891003

铁虫 (初入文坛)
最快的是用10%或者5%的chelex-100煮10分钟，离心10分钟，上清液里。
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不懂就不懂，不能欺人，也不自欺
5楼2014-10-16 19:30:12
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七小艾

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by flhua at 2014-09-21 10:04:44
可以吧，好像先用液氮研磨破壁，然后在用SDS 溶菌酶 蛋白酶 RNA酶，酚氯仿抽提等后续常规步骤

我也在做放线菌，不过我是提蛋白组，液氮研磨破壁效果很差。第一次做液氮研磨，有什么讲究吗？比如大概多少菌体，要研磨多久？我是加液氮研磨，到液氮挥发光了再加再研磨，重复10次。不知道这样操作有没有问题，求指教
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6楼2014-10-23 15:37:39
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木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

冻融交替破壁，再溶菌酶过夜，效果很好
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7楼2014-12-03 15:34:32
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开小猫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

提DNA的话可以直接刮菌丝提啊，我们以前都是这么提的，可以多刮一些，不过后面用异丙醇沉淀的时候有可能看不到沉淀，把上清倒掉的时候小心点就ok~
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8楼2014-12-05 14:13:58
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lgd19891003

铁虫 (初入文坛)
如果用量不大的话，直接刮菌丝提是可以的，黄豆粒大小可行
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不懂就不懂，不能欺人，也不自欺
9楼2017-09-05 09:10:53
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