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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
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tuhua

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有2人参与

最近正在设计载体构建的引物，打算用PMD18-T ，PBI121构建正义表达载体，酶切位点用KpnI和XbaI，目的基因上没有这两个酶切位点，但是PMD18-T载体上有XbaI酶切位点，这样是可以做的吗？
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1楼 2014-09-07 18:55:56
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tuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-09 12:07:15
可以，酶切的时候T载体已经没用了。

谢谢
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8楼2014-09-09 16:46:01
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kehan777

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tuhua: 金币+2 2014-09-08 17:03:46
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:59:51
看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点；
你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基；
对于插入到PMD18-T载体，设计引物时，直接加入酶切位点和保护性碱基在你的目的基因上即可，
对于插入到PBI121载体，XbaI一端的引物可以和PMD18-T的相同；KpnI一端的引物，你需要在基因上再加入一个“PBI121载体MCS有的，而你基因上没有的”酶切位点，假如BamHI，基因上没有，则引物的框架：保护性碱基+BamHI+KpnI+ 一段目的基因。
我想不一定非要KpnI这个酶切位点，你也可以选择载体上其他多克隆位点啊，保证翻译后ORF正确就行吧。
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3楼2014-09-08 09:23:43
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tuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kehan777 at 2014-09-08 09:23:43
看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点；
你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基；
对于插入到PMD18-T载体，设计 ...

我的载体是经过改造的，价格KpnI位点
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4楼2014-09-08 17:01:31
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tuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kehan777 at 2014-09-08 09:23:43
看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点；
你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基；
对于插入到PMD18-T载体，设计 ...

我的载体改造了，加入了KpnI位点，去掉了部分位点
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5楼2014-09-08 17:02:27
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