| 查看: 942 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
载体构建已有2人参与
|
||
| 最近正在设计载体构建的引物，打算用PMD18-T ，PBI121构建正义表达载体，酶切位点用KpnI和XbaI，目的基因上没有这两个酶切位点，但是PMD18-T载体上有XbaI酶切位点，这样是可以做的吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
科研赋能时尚宠物：检测护航，焕新养宠体验
已经有0人回复
-
精测粗蛋白：以科研标尺，守品质核心
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有75人回复
-
解码碳水世界：科研探秘，赋能营养与应用
已经有0人回复
-
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
8楼2014-09-09 16:46:01
kehan777
木虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 2475.4
- 红花: 4
- 帖子: 163
- 在线: 109.9小时
- 虫号: 1949056
- 注册: 2012-08-21
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tuhua: 金币+2 2014-09-08 17:03:46
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:59:51
感谢参与，应助指数 +1
tuhua: 金币+2 2014-09-08 17:03:46
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:59:51
|
看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点； 你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基； 对于插入到PMD18-T载体，设计引物时，直接加入酶切位点和保护性碱基在你的目的基因上即可， 对于插入到PBI121载体，XbaI一端的引物可以和PMD18-T的相同；KpnI一端的引物，你需要在基因上再加入一个“PBI121载体MCS有的，而你基因上没有的”酶切位点，假如BamHI，基因上没有，则引物的框架：保护性碱基+BamHI+KpnI+ 一段目的基因。 我想不一定非要KpnI这个酶切位点，你也可以选择载体上其他多克隆位点啊，保证翻译后ORF正确就行吧。 |
3楼2014-09-08 09:23:43
4楼2014-09-08 17:01:31
5楼2014-09-08 17:02:27