应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
51/1返回列表
查看: 1191  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tuhua

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有2人参与

最近正在设计载体构建的引物，打算用PMD18-T ，PBI121构建正义表达载体，酶切位点用KpnI和XbaI，目的基因上没有这两个酶切位点，但是PMD18-T载体上有XbaI酶切位点，这样是可以做的吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-09-07 18:55:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-09 12:07:15
可以，酶切的时候T载体已经没用了。

谢谢
回复此楼
8楼2014-09-09 16:46:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

kehan777

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tuhua: 金币+2 2014-09-08 17:03:46
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:59:51
看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点；
你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基；
对于插入到PMD18-T载体，设计引物时，直接加入酶切位点和保护性碱基在你的目的基因上即可，
对于插入到PBI121载体，XbaI一端的引物可以和PMD18-T的相同；KpnI一端的引物，你需要在基因上再加入一个“PBI121载体MCS有的，而你基因上没有的”酶切位点，假如BamHI，基因上没有，则引物的框架：保护性碱基+BamHI+KpnI+ 一段目的基因。
我想不一定非要KpnI这个酶切位点，你也可以选择载体上其他多克隆位点啊，保证翻译后ORF正确就行吧。
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-08 09:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kehan777 at 2014-09-08 09:23:43
看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点；
你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基；
对于插入到PMD18-T载体，设计 ...

我的载体是经过改造的，价格KpnI位点
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-08 17:01:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kehan777 at 2014-09-08 09:23:43
看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点；
你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基；
对于插入到PMD18-T载体，设计 ...

我的载体改造了，加入了KpnI位点，去掉了部分位点
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-09-08 17:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭