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载体构建 已有2人参与
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| 最近正在设计载体构建的引物，打算用PMD18-T ，PBI121构建正义表达载体，酶切位点用KpnI和XbaI，目的基因上没有这两个酶切位点，但是PMD18-T载体上有XbaI酶切位点，这样是可以做的吗？ |
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kehan777
木虫 (小有名气)
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- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tuhua: 金币+2 2014-09-08 17:03:46
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:59:51
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tuhua: 金币+2 2014-09-08 17:03:46
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:59:51
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看了载体图谱，PMD18-T是有KpnI和XbaI 这两个酶切位点的，而PBI121只有XbaI，没有KpnI位点； 你说基因上没有这两个酶切位点，所以引物设计时你要在基因上加入酶切位点和保护性碱基； 对于插入到PMD18-T载体，设计引物时，直接加入酶切位点和保护性碱基在你的目的基因上即可， 对于插入到PBI121载体，XbaI一端的引物可以和PMD18-T的相同；KpnI一端的引物，你需要在基因上再加入一个“PBI121载体MCS有的，而你基因上没有的”酶切位点，假如BamHI，基因上没有，则引物的框架：保护性碱基+BamHI+KpnI+ 一段目的基因。 我想不一定非要KpnI这个酶切位点，你也可以选择载体上其他多克隆位点啊，保证翻译后ORF正确就行吧。 |
3楼2014-09-08 09:23:43
4楼2014-09-08 17:01:31
5楼2014-09-08 17:02:27
6楼2014-09-09 11:46:06
