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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » TEV酶切体系中是否可以加尿素
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NanHao1991

铜虫 (初入文坛)

[求助] TEV酶切体系中是否可以加尿素 已有1人参与

目前在用TEV酶对融合蛋白进行酶切，切除标签。
遇到的问题：酶切不完全，只有5%-10%的融合蛋白被酶切。
怀疑：可能是蛋白折叠将TEV酶切位点阻碍住
对策：加尿素将蛋白打开，再酶切。
网上查不到TEV酶是否可以承受尿素，问问大家。
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Talentisenduring***
1楼 2014-09-03 09:05:05
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~沙~

禁虫
本帖内容被屏蔽
3楼2020-08-19 14:51:30
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shyh1983

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:04:44
1.TEV相对来说特异性还是挺高的，建议现在酶切体系里加终浓度为1M尿素试试，若不行，则换0.5M试验下；
2.不知你用多少温度酶切，可以试着提高温度至37摄氏度，如果你就是用此温度切的，当我没说；
3.尽量提高目的蛋白的纯度，有利于特异性切割；
4.查些文献，看TEV酶是否需要一些特殊的辅助因子；
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2楼2014-09-03 16:01:48
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