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NanHao1991

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[求助] TEV酶切体系中是否可以加尿素已有1人参与

目前在用TEV酶对融合蛋白进行酶切，切除标签。
遇到的问题：酶切不完全，只有5%-10%的融合蛋白被酶切。
怀疑：可能是蛋白折叠将TEV酶切位点阻碍住
对策：加尿素将蛋白打开，再酶切。
网上查不到TEV酶是否可以承受尿素，问问大家。

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Talentisenduring***

1楼 2014-09-03 09:05:05

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shyh1983

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:04:44

1.TEV相对来说特异性还是挺高的，建议现在酶切体系里加终浓度为1M尿素试试，若不行，则换0.5M试验下；
2.不知你用多少温度酶切，可以试着提高温度至37摄氏度，如果你就是用此温度切的，当我没说；
3.尽量提高目的蛋白的纯度，有利于特异性切割；
4.查些文献，看TEV酶是否需要一些特殊的辅助因子；