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NanHao1991

铜虫 (初入文坛)

[求助] TEV酶切体系中是否可以加尿素已有1人参与

目前在用TEV酶对融合蛋白进行酶切,切除标签。
遇到的问题:酶切不完全,只有5%-10%的融合蛋白被酶切。
怀疑:可能是蛋白折叠将TEV酶切位点阻碍住
对策:加尿素将蛋白打开,再酶切。
网上查不到TEV酶是否可以承受尿素,问问大家。
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Talentisenduring***
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shyh1983

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:04:44
1.TEV相对来说特异性还是挺高的,建议现在酶切体系里加终浓度为1M尿素试试,若不行,则换0.5M试验下;
2.不知你用多少温度酶切,可以试着提高温度至37摄氏度,如果你就是用此温度切的,当我没说;
3.尽量提高目的蛋白的纯度,有利于特异性切割;
4.查些文献,看TEV酶是否需要一些特殊的辅助因子;
2楼2014-09-03 16:01:48
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3楼2020-08-19 14:51:30
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