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yanqiwan

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[求助] 求助链霉亲和素包被问题！

各位战友，本人做亲和素包被遇到问题，现将问题描述如下，求各位点拨。非常感激！
技术路线：
第一步：在corning 高吸附酶标板上包被5ug/ml亲和素
第二步：加生物标记DNA
第三步：加蛋白和DNA反应
第四步：加和蛋白反应的his6 HRP抗体

封闭液用的roche 封闭液，之前用索莱宝公司的亲和素包被，整体实验结果较好。后改换成amresco亲和素以及索莱宝新批次的亲和素后，背景值超高，OD绝对值达2.多。
背景值产生条件：
1.技术路线步骤中不加DNA，
2.技术路线步骤中不加蛋白，
3.将亲和素包被，封闭后，直接加HRP标记抗体。

用之前做出结果的亲和素得到的这3种背景值最多不超过0.2.而现在的生物素所得OD值很高。曾将索莱宝亲和素和amresco在同一酶标板操作，前者所得结果正常。请问战友：
1.知不知道哪家的亲和素用于包被背景低？
2.看下我的包被是否有问题？
3.能不能介绍好一些的包被方法。
再次感谢！

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1楼 2014-09-02 17:01:51

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