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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于缓冲液的配制
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winnerzhi

金虫 (正式写手)

[交流] 关于缓冲液的配制

最近在配醋酸缓冲液和酒石酸缓冲液，网上有各种版本的配制方法，以0.2M，pH4.5醋酸缓冲液为例：
方法一：分别配制0.2M的醋酸和醋酸钠溶液，按比例混合到pH4.5.
方法二：分别配制0.4M的醋酸和醋酸钠溶液，按比例混合到pH4.5
方法三：按照Henderson-Hasselbalch方程，4.5=4.75+lg（）算出比例，用蒸馏水稀释。
我们实验室只有去离子水，所以方法三直接让我忽视了，我不知道方法一和方法二哪个是正确的，又是什么原理呢？
还有就是配置缓冲液有没有一种通用的方法，或者说比较公认的方法？
参考帖子：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2834583
                 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4420058
                 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4343676
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那么多的未知构成了美妙的人生
1楼2014-08-27 16:24:13
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帖航

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
winnerzhi: 金币+5 2014-08-28 10:24:38
配成0.2M再混合，缓冲液的浓度指的是共轭酸碱对的混合浓度，不是其中一种的浓度，大部分生物化学实验指导书上都有配方的。Henderson-Hasselbalch方程是无机化学学的，你可以用它先算出共轭酸碱对的浓度比值，在用上和为0.2M就能算出来了。还有一般意义上的去离子水要比蒸馏水好，去离子水是通过膜过滤系统得到的（反渗透），蒸馏不用我说，不管蒸馏多少次，是无法完全去除水中的离子的。不过实验室用这两种水没有分得很细。
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3楼2014-08-28 09:56:46
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帖航

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by tuoxian at 2014-08-27 16:30:41

这是书上的配方，你看看
关于缓冲液的配制
未命名.jpg
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4楼2014-08-28 10:06:28
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winnerzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 帖航 at 2014-08-28 09:56:46
配成0.2M再混合，缓冲液的浓度指的是共轭酸碱对的混合浓度，不是其中一种的浓度，大部分生物化学实验指导书上都有配方的。Henderson-Hasselbalch方程是无机化学学的，你可以用它先算出共轭酸碱对的浓度比值，在用上 ...

好像去离子水的pH和蒸馏水的pH不同吧，去离子水好像是偏酸性的，蒸馏水是中性的，如果按照计算的方法用来配缓冲液是不是会影响pH？我自己试过，配出来的缓冲液用pH计测pH要比目标pH低，大概0.4左右吧，不知道是不是我pH计的问题，因为设备比较老了
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那么多的未知构成了美妙的人生
5楼2014-08-28 10:24:16
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帖航

银虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
winnerzhi: 金币+5 2014-08-28 12:28:05
引用回帖:
5楼: Originally posted by winnerzhi at 2014-08-28 10:24:16
好像去离子水的pH和蒸馏水的pH不同吧，去离子水好像是偏酸性的，蒸馏水是中性的，如果按照计算的方法用来配缓冲液是不是会影响pH？我自己试过，配出来的缓冲液用pH计测pH要比目标pH低，大概0.4左右吧，不知道是不是 ...

去离子水和蒸馏水都应该呈中性，pH偏差有很多原因，水源处理不彻底，你配置缓冲液时引入的系统误差和随机误差，等等原因，如果pH有偏差，直接用你的共轭酸碱调，没有问题。
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6楼2014-08-28 11:20:01
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